【摘 要】
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D-对羟基苯甘氨酸(D-p-hydroxyphenylglycine,D-HPG)是临床上广泛使用的半合成β-内酰胺类抗生素的重要结构部分.在工业生产上可利用D,L-对羟基苯乙内酰脲(D,L-p-hydroxyphen
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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D-对羟基苯甘氨酸(D-p-hydroxyphenylglycine,D-HPG)是临床上广泛使用的半合成β-内酰胺类抗生素的重要结构部分.在工业生产上可利用D,L-对羟基苯乙内酰脲(D,L-p-hydroxyphenylhydantoin,D,L-HPH)为原料经D-乙内酰脲酶(D-hydantoinase,Dhase,EC 3.5.2.2)和D-脱氨甲酰基酶(D-decarbamoylase,Dcase,EC3.5.1.6)水解而获得.该项工作对一株能转化D,L-对羟基苯乙内酰脲为D-对羟基苯甘氨酸的菌株MMR003进行了细菌分类学鉴定,该菌为皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapickettii).实验通过Southern杂交,部分文库构建和筛选,并经一系列亚克隆测序分析,获得一长度为137bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸的D-乙内酰脲酶基因.用该基因序列构建的高表达质粒pXZPH2转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后,检测到D-乙内酰脲酶活性.该基因编码的氨基酸序列经Blast同源比较分析与放射形土壤杆菌NRRL B11291所产相应酶有85﹪的同源性.以D,L-对羟基苯乙内酰脲为底物测得的表达酶的活力为0.66U/ml,比出发菌株MMR003提高了2倍.
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