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第一部分肺泡II型上皮细胞的培养和鉴定以及细胞高氧损伤模型的建立目的成功进行原代AECII的培养和鉴定,并成功建立高氧肺损伤的细胞模型,为下一步的实验打下基础。方法取怀孕18天的Sprague-Dawley(SD)大鼠采用本实验室原创的差速离心和差速贴壁的原代AECII的培养方法进行培养。采用本实验室自主研发的密闭高氧装置通入95%的氧气对AECII进行高氧模型的建立。光镜和透射电镜及免疫荧光技术分别对正常及高氧处理的AECII的形态、数目及表面特异性蛋白C(SP-C)的表达进行观察及检测。结果正常培养的AECII光镜下外形为多边形岛状分布,细胞间紧密连接且胞核明显、胞浆有大量颗粒性物质;透射电镜下胞膜可见微绒毛,胞内可见大量嗜饿性板层小体。免疫荧光可见SP-C的大量表达。而经高氧处理的AECII光镜下胞间裂隙增大且胞核分裂;透射电镜下可见微绒毛部分消失,胞内出现脂肪空泡。免疫荧光可见SP-C微弱表达。结论AECII的生长正常可达到实验所需条件,高氧干预的模型建立可达到预期目的,可进行后续实验。第二部分神经肽P物质调控Notch/Delta信号通路对肺泡II型上皮细胞增殖的影响目的探讨神经肽P物质(substance P,SP)调控Notch/Delta信号对胎鼠高氧肺损伤后肺泡II型上皮细胞(AECII)增殖的影响。方法将孕19天的SD大鼠剖宫产后取其胎鼠肺组织进行原代AECII分离培养。原代AECII随机分为6组,分别给于空气(氧体积分数为21%)、高氧(氧体积分数为95%)、神经肽P物质(substance P,SP)、SP受体拮抗剂(L703.606);Notch通路阻断剂(MW167)干预。干预后光镜下观察各组细胞增殖状况;计数干预后6h、12h、18h、24h时间点细胞个数;CCK8法检测各组细胞存活率;流式细胞仪检测各组细胞的周期表达;实时荧光定量PCR检测各组配体Dll1和Dll4以及靶基因Hes1m RNA的表达差异。结果与空气组比较,经高氧及MW167干预处理的各组其细胞的数目、存活率、增殖能力明显降低。而SP干预后其存活率、增值能力明显增强。经高氧及MW167干预处理后,Notch通路的配体Dll1、Dll4和靶基因Hes1的表达明显降低。而SP干预后其配体Dll1、Dll4和靶基因Hes1的表达明显增加。结论SP可能通过调控Notch/Delta信号通路表达,适当促进AECII的增殖,减少其氧化损伤,从而对高氧肺损伤进行一定的保护作用。