【摘 要】
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目的:探讨靶向抑制CDCA5基因对髓系白血病细胞增殖的影响及机制。方法:构建CDCA5特异性siRNA慢病毒载体,用293T工具细胞以Western Blot外源验证靶基因的干扰效果,以含有CDCA5
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目的:探讨靶向抑制CDCA5基因对髓系白血病细胞增殖的影响及机制。方法:构建CDCA5特异性siRNA慢病毒载体,用293T工具细胞以Western Blot外源验证靶基因的干扰效果,以含有CDCA5的特异性siRNA(shCDCA5)及阴性对照(sh-Ctrl)的病毒为载体,分别转染髓系白血病细胞系HL60与K562。荧光显微镜下观察转染后细胞形态及转染效率,PCR法检测CDCA5 mRNA水平,CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V-APC单染法流式细胞仪及Caspase3/7活性法检测细胞凋亡。结果:在293T细胞特异性干扰组中CDCA5的FLAG-tag表达量明显下降,证实为有效siRNA干扰。慢病毒转染后,荧光显微镜下观察细胞转染效率达到80%以上,HL60与K562细胞内CDCA5mRNA的相对表达水平分别为对照组的(37.7±3.7)%与(19±0.9)%,证实siRNA可明确抑制CDCA5基因的转录。HL60与K562细胞实验组细胞特异性消减CDCA5表达后,其细胞增殖受抑,凋亡水平明显增加。结论:靶向抑制CDCA5可抑制髓系白血病细胞的生长,与引起细胞凋亡增加有关,该基因或可作为潜在分子靶点应用于白血病的治疗。
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