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人类Fas配体(hFasL)是一种细胞凋亡因子，属于肿瘤坏死因子家族，是死亡蛋白Fas的天然受体。它是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，通过与细胞表面的Fas受体结合可引起Fas表达阳性的细胞凋亡。由于可以诱导肿瘤细胞凋亡，hFasL在肿瘤、AIDS、感染性疾病等的治疗中有着广阔的应用前景。
本文分别在原核表达系统大肠杆菌和真核表达系统盘基网柄菌中以可溶性形式实现了hFasL的高水平表达。从重组盘基网柄菌AX3-pLu8中提取重组质粒pMB74-hFasL作为模板，PCR成功扩增编码hFasL胞外区第141～281个氨基酸的基因序列。选用质粒pET32a(+)作为原核表达载体(其上的TrxA融合标签可以改善重组蛋白的可溶性)，将hFasL基因插入质粒pET32a(+)的多克隆位点，转化大肠杆菌，成功构建了重组表达菌株E. coli BL21(DE3)-pET32a-hFasL。测序结果表明，插入的目的目的基因大小为438bp，经序列比对发现此片段与人类Fas配体序列的同源性为100％，最终证明重组菌株E. coli BL21(DE3)-pET32a-hFasL构建成功。将此重组菌株接种至LB培养基，使用IPTG作为诱导剂，通过考察诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间等因素，获得最适诱导条件，在此条件下hFasL表达量可达1.0mgL-1。
采用10 L发酵罐，选用全合成培养基SIH发酵培养盘基网柄菌AX3-FH。间歇培养至80 h，菌体密度最大可达8.3×107ml-1，hFasL最高产量为420μg L-1。采用亲和层析(Ni-NTA)纯化重组大肠杆菌和重组盘基网柄菌表达的hFasL，经鉴定，目标蛋白纯度分别为94％和90％。采用MTT法检测两种不同来源的重组hFasL体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性，首先通过考察接种细胞数量、MTT添加量和反应时间等因素，确定MTT反应的最适条件。在此条件下，两种重组hFasL对人宫颈癌细胞和人肺癌细胞的增殖抑制作用上有着相似的生物学活性，并且都呈现类似的剂量依赖关系。