马来酸桂哌齐特对脑缺血大鼠缺血周边区磷酸化Akt蛋白表达的影响

• 作 者: 丁玲
• 机 构: 中南大学
• 出 处: 中南大学
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 脑缺血 细胞凋亡 马来酸桂哌齐特 蛋白表达 缺血再灌注

目的:动态观察马来酸桂哌齐特对大鼠局灶性脑缺血／再灌后缺血周边区磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达的影响，探讨该药对脑缺血的保护作用机制。
方法:用线栓法制备局灶性大脑中动脉脑缺血／再灌注模型。试验分为正常组、假手术组、生理盐水组(Ns组)、马来酸桂哌齐特组(CM组)。在脑缺血再灌后1h、3h、6h、12h、1d、2d，3d、7d共8个时间点，动态观察缺血周边区的存活神经元、程序化死亡细胞及磷酸化Akt蛋白的表达。应用尼氏染色显示存活神经元；TUNEL方法检测程序化死亡细胞：免疫组织化学方法及Western Blot方法观察磷酸化Akt蛋白的表达情况。
结果:
1．大鼠局灶性大脑中动脉脑缺血／再灌注模型：模型成功率为73.6％，总死亡率为16.1％。
2．存活神经元：与正常组和假手术组相比，Ns组缺血周边区存活神经元于再灌后6h开始减少，2d时最少，第3 d较2d增加；CM组再灌6h后各时间点缺血周边区神经元与假手术组相比有明显减少，12h后较NS组多。
3．神经元凋亡：正常组和假手术组：偶见凋亡细胞，两组间无显著性差异；NS组可见缺血周边区于再灌后3h开始出现TUNEL阳性细胞增加，与正常组及假手术组相比差异有统计学意义，2d达到高峰，3d后凋亡细胞减少，7d仍有较多表达；CM组与NS组阳性细胞数的动态变化趋势类似，但CM组再灌12h后各时点阳性细胞数显著减少。
4．磷酸化Akt蛋白的表达：免疫组化法显示正常组与假手术组大鼠缺血周边区可见少量磷酸化Akt阳性细胞，两组间差异无统计学意义；Ns组再灌后3h可见缺血周边区阳性细胞增加，6h达到高峰，1d回到对照组水平，在第3d出现第二次增加，持续到第7d；CM组：缺血周边区磷酸化Akt阳性细胞数在1～6h和NS组大致相近，12h较NS组明显增加，以后CM组较NS组增加明显，差别无统计学意义。用Western Blot方法检测得磷酸化Akt的蛋白表达变化与磷酸化Akt阳性细胞的变化相一致。
结论:
上调磷酸化Akt蛋白表达从而减少神经元凋亡，可能是马来酸桂哌齐特保护脑缺血损伤的机制之一。