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冬虫夏草[Ophiocordyceps sinensis(Berk.) G.H.Sung,J.M.Sung, Hywel-Jones& Spatafora:≡Cordyceps sinensis(Berk.) Sacc.]是我国最为名贵的传统药材之一,具有很高的药用价值和经济价值。但是冬虫夏草作为青藏高原特有的真菌,天然产量非常有限,且其赖以生存的天然生境发生变化,人类的掠夺式开发和不合理利用进一步加剧了对这一宝贵自然资源的威胁。此外,研究结果表明冬虫夏草菌液体培养菌丝体和天然冬虫夏草产生相似的代谢产物,具有相似的生物活性。因此,通过液体深层培养,生产冬虫夏草菌丝体作为替代品,具有巨大的产品开发潜力,并对保护天然冬虫夏草及其生态环境具有重要的意义。 本研究探讨了促进冬虫夏草产孢的营养条件,比较了17种碳源和11种氮源对于冬虫夏草固体培养对分生孢子产量的影响,筛选出产量最高的碳源和氮源分别为碳源13、氮源2,为冬虫夏草研究提供更多菌剂资源。 在研究外源添加物对冬虫夏草菌丝体积累量的影响中,通过调整添加物1和添加物2的3个不同浓度,发现添加物1的8%浓度和添加物2的4%浓度可以获得较高的菌丝体产量。其中,添加物1对应的菌球细小而分散,菌液清澈,是很好的种子液来源;添加物2可以显著提高菌丝体干重,同时可以用作发酵罐消泡剂,发挥双重作用。 通过独立补料碳、氮源的不同方案对冬虫夏草菌丝体产量影响的研究,筛选得到适宜的补料时间和补料浓度。进一步采用联合补料,通过进行正交试验,发现在培养10d时将碳、氮源的浓度分别补充至47 g/L和0.76 g/L,使菌丝体产量提高了143%,同时腺苷的产量也提高了18.2倍。研究结果还表明,在生长对数期的10 d时进行碳、氮源补充对于菌丝体产量具有最大的促进作用,而且氮源补料对冬虫夏草菌丝体产量的促进作用比碳源更明显。