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目的:
研究蛋白磷酸酶 1 核目标亚基（ phosphatase 1 nuclear-targeting subunit, PNUTS）对电离辐射（ionizing radiation, IR）诱导鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition， EMT)的影响，并探索其可能参与的信号通路。
方法:
1. 分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞，通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变；应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化；分别采用real-time PCR 和 Western blot 法检测 EMT 相关蛋白 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin) mRNA及蛋白水平的变化。
2. Western blot检测鼻咽癌CNE-2细胞中PNUTS在IR前后的表达情况；利用siRNA靶向沉默鼻咽癌CNE-2细胞PNUTS的表达，通过实时荧光定量PCR和Western blot检测转染效率；成功转染后，Western blot检测EMT蛋白标志物的表达，划痕实验和Transwell实验检测鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。
3. 采用不同剂量的X射线（0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy）照射鼻咽癌CNE-2细胞， Western blot检测AKT和p-AKT蛋白水平的变化；siRNA靶向沉默鼻咽癌CNE-2细胞PNUTS的表达后，Western blot检测IR联合si-PNUTS后AKT和p-AKT蛋白水平的变化。
结果:
1. 经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的“鹅卵石”样或纺锤形，且伸出伪足，细胞间隙增大，细胞的侵袭和迁移能力增强(P＜0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示，与未照射组相比，各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P＜0.01)，而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P＜0.05)。
2. 与未照射组相比，IR组细胞中PNUTS的表达显著升高(P＜0.01)；siRNA转染鼻咽癌CNE-2细胞后，PNUTS mRNA 和蛋白的表达均明显下降(P＜0.01)；与IR组相比，IR联合si-PNUTS组细胞的侵袭和迁移能力显著减弱(P＜0.01)，同时，E-cadherin蛋白表达上调(P＜0.01)，而N-cadherin和vimentin蛋白表达下调(P＜0.01)。
3. 经X线照射后，与未照射组相比，各照射组细胞中p-AKT蛋白的水平显著升高(P＜0.01)，而AKT的表达无明显变化；siRNA转染鼻咽癌CNE-2细胞后，与IR组相比，IR联合si-PNUTS组p-AKT蛋白的水平明显下降(P＜0.01)，AKT的表达无显著变化。
结论:
1. IR能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT，并增加细胞的侵袭迁移能力。
2. IR能够促进鼻咽癌CNE-2细胞中PNUTS的表达；siRNA靶向沉默PNUTS表达可抑制鼻咽癌CNE-2细胞的侵袭和转移，并逆转EMT过程。
3. PNUTS 对 IR 诱导鼻咽癌 CNE-2 细胞 EMT 的调控可能与PI3K/AKT信号通路有关。
研究蛋白磷酸酶 1 核目标亚基（ phosphatase 1 nuclear-targeting subunit, PNUTS）对电离辐射（ionizing radiation, IR）诱导鼻咽癌CNE-2细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition， EMT)的影响，并探索其可能参与的信号通路。
方法:
1. 分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞，通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变；应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化；分别采用real-time PCR 和 Western blot 法检测 EMT 相关蛋白 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin) mRNA及蛋白水平的变化。
2. Western blot检测鼻咽癌CNE-2细胞中PNUTS在IR前后的表达情况；利用siRNA靶向沉默鼻咽癌CNE-2细胞PNUTS的表达，通过实时荧光定量PCR和Western blot检测转染效率；成功转染后，Western blot检测EMT蛋白标志物的表达，划痕实验和Transwell实验检测鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。
3. 采用不同剂量的X射线（0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy）照射鼻咽癌CNE-2细胞， Western blot检测AKT和p-AKT蛋白水平的变化；siRNA靶向沉默鼻咽癌CNE-2细胞PNUTS的表达后，Western blot检测IR联合si-PNUTS后AKT和p-AKT蛋白水平的变化。
结果:
1. 经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的“鹅卵石”样或纺锤形，且伸出伪足，细胞间隙增大，细胞的侵袭和迁移能力增强(P＜0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示，与未照射组相比，各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P＜0.01)，而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P＜0.05)。
2. 与未照射组相比，IR组细胞中PNUTS的表达显著升高(P＜0.01)；siRNA转染鼻咽癌CNE-2细胞后，PNUTS mRNA 和蛋白的表达均明显下降(P＜0.01)；与IR组相比，IR联合si-PNUTS组细胞的侵袭和迁移能力显著减弱(P＜0.01)，同时，E-cadherin蛋白表达上调(P＜0.01)，而N-cadherin和vimentin蛋白表达下调(P＜0.01)。
3. 经X线照射后，与未照射组相比，各照射组细胞中p-AKT蛋白的水平显著升高(P＜0.01)，而AKT的表达无明显变化；siRNA转染鼻咽癌CNE-2细胞后，与IR组相比，IR联合si-PNUTS组p-AKT蛋白的水平明显下降(P＜0.01)，AKT的表达无显著变化。
结论:
1. IR能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT，并增加细胞的侵袭迁移能力。
2. IR能够促进鼻咽癌CNE-2细胞中PNUTS的表达；siRNA靶向沉默PNUTS表达可抑制鼻咽癌CNE-2细胞的侵袭和转移，并逆转EMT过程。
3. PNUTS 对 IR 诱导鼻咽癌 CNE-2 细胞 EMT 的调控可能与PI3K/AKT信号通路有关。