论文部分内容阅读
目的：lncRNAs (long noncoding RNAs)是一类长链非编码RNAs，它在肿瘤的发生和发展过程中扮演了非常重要的角色。LINC01296 (large intergenic noncoding RNA 01296)已被证实在多种肿瘤（胃癌、结肠癌、胆管癌等）中发挥着促癌的作用，但是其在肝细胞肝癌 (HCC, hepatocellular carcinoma)中的作用尚未报道。本研究旨在探究LINC01296在HCC组织和细胞中的表达水平以及其对HCC细胞生物学功能的影响，并探究其在肝癌发生和发展中的可能机制。
方法：利用Gene Expression Profiling Interactive Analysis (GEPIA)和 The Cancer Genome Atlas (TCGA)数据库及实时定量 PCR (Transcription quantitative real-time polymerase chain reaction, rt-qPCR)分析LINC01296在HCC组织及癌旁组织中的表达水平，同时检测其在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。将携带有LINC01296过表达载体或沉默载体的慢病毒感染进SMMC-7721或Huh7细胞中，分别采用 CCK8 法、克隆形成实验、transwell 迁移和侵袭实验检测LINC01296对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用Western blotting检测LINC01296对表皮间质转化(epithelial–mesenchymal transition ， EMT)相关标志蛋白的作用。将携带有miR-122-5P过表达载体或沉默载体的质粒转染进SMMC-7721或Huh7细胞后，利用rt-qPCR检测LINC01296 和 miR-122-5P 在表达水平方面的相互影响。将LINC01296-shRNA3和anti-miR-122共转染进Huh7细胞中，分别利用CCK8、克隆形成实验、transwell迁移和侵袭实验及Western blotting探究miR-122-5P对LINC01296引起的HCC细胞生物学效应的逆转作用。
结果：LINC01296在HCC组织和细胞中的表达量均显著上调（P值均＜0.01），在SMMC-7721细胞中LINC01296的过表达明显促进了细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT的活性，而在Huh7细胞中沉默LINC01296后结果恰好相反(P值均＜0.01)。在HCC组织和细胞中LINC01296和miR-122-5P可以相互抑制彼此的表达量（P值均＜0.01）。在 LINC01296-shRNA3 和 anti-miR-122 共转染的 Huh7 细胞中， anti-miR-122可以逆转LINC01296-shRNA3引起的生物学效应（P值均＜0.01）。
结论：LINC01296在HCC组织和细胞中均呈现高表达，且其在HCC中发挥着致癌的作用，促进了HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。机制方面，LINC01296可以通过促进EMT的活性来促进HCC细胞的迁移和侵袭，同时，miR-122-5P可以结合到LINC01296的3UTR区并逆转其生物学功能。
方法：利用Gene Expression Profiling Interactive Analysis (GEPIA)和 The Cancer Genome Atlas (TCGA)数据库及实时定量 PCR (Transcription quantitative real-time polymerase chain reaction, rt-qPCR)分析LINC01296在HCC组织及癌旁组织中的表达水平，同时检测其在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。将携带有LINC01296过表达载体或沉默载体的慢病毒感染进SMMC-7721或Huh7细胞中，分别采用 CCK8 法、克隆形成实验、transwell 迁移和侵袭实验检测LINC01296对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用Western blotting检测LINC01296对表皮间质转化(epithelial–mesenchymal transition ， EMT)相关标志蛋白的作用。将携带有miR-122-5P过表达载体或沉默载体的质粒转染进SMMC-7721或Huh7细胞后，利用rt-qPCR检测LINC01296 和 miR-122-5P 在表达水平方面的相互影响。将LINC01296-shRNA3和anti-miR-122共转染进Huh7细胞中，分别利用CCK8、克隆形成实验、transwell迁移和侵袭实验及Western blotting探究miR-122-5P对LINC01296引起的HCC细胞生物学效应的逆转作用。
结果：LINC01296在HCC组织和细胞中的表达量均显著上调（P值均＜0.01），在SMMC-7721细胞中LINC01296的过表达明显促进了细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT的活性，而在Huh7细胞中沉默LINC01296后结果恰好相反(P值均＜0.01)。在HCC组织和细胞中LINC01296和miR-122-5P可以相互抑制彼此的表达量（P值均＜0.01）。在 LINC01296-shRNA3 和 anti-miR-122 共转染的 Huh7 细胞中， anti-miR-122可以逆转LINC01296-shRNA3引起的生物学效应（P值均＜0.01）。
结论：LINC01296在HCC组织和细胞中均呈现高表达，且其在HCC中发挥着致癌的作用，促进了HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。机制方面，LINC01296可以通过促进EMT的活性来促进HCC细胞的迁移和侵袭，同时，miR-122-5P可以结合到LINC01296的3UTR区并逆转其生物学功能。