骨髓基质干细胞移植联合应用G-CSF对大鼠脊髓损伤修复的影响

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目的:探讨骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal stem cells, BMSCs)移植联合应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor, G-CSF)对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)的治疗修复作用。方法:取8周龄大小的4只健康Wistar大鼠骨髓,分离、培养BMSCs,在移植前24小时取第三代BMSCs行Hoechst33342标记,将标记细胞调至1×105/ul制备成BMSCs悬液备用。48只Wistar大鼠采用自制改良的Allen’s装置在T11水平制成大鼠急性脊髓损伤模型,根据实验设计要求将动物模型随机分成4组(n=12):A组为BMSCs移植联用G-CSF治疗组,B、C组为单纯BMSCs移植和G-CSF治疗组,D组为损伤对照组。术后1、2、3、4周采用Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)评分评价大鼠后肢神经功能恢复情况;术后4周取材用荧光显微镜在损伤区及周缘观察BMSCs存活、分化情况,并行HE染色作大体组织学观察;免疫荧光染色检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)和神经丝蛋白200(neurofilament 200, NF-200)的表达变化。结果:术后1-4周,A组大鼠BBB评分呈持续升高趋势,A组评分均明显高于其它三组,D组最低,差异均有统计学意义(P<0.01);B组术后3、4周高于C组(P<0.01);B、C组与D组比较差异有统计学意义(P<0.01)。HE染色显示,BMSCs联合应用G-CSF对脊髓损伤的修复作用最好,D组恢复最差,B、C组介于A、D组之间;免疫荧光染色示,术后4周在SCI损伤区及周缘可见大量Hoechst33342标记的BMSCs聚集,灰质分布较白质多,BMSCs从移植部位向周围损伤组织迁移,A组存活细胞数高于B组;A组在脊髓损伤区及周缘NSE、NF200阳性细胞均较B组多,C组未见明显的NSE、NF200阳性细胞,但在损伤周缘有大量的GFAP阳性细胞,并向脊髓损伤空腔内延伸;D组损伤区看见大量结构杂乱的GFAP阳性细胞,瘢痕组织形成明显,损伤区未见明显的脊髓再生现象及NSE、NF-200阳性细胞。结论:BMSCs移植能在脊髓损伤周围存活并分化;BMSCs移植联用G-CSF更能促进神经修复及功能的恢复;二者联用具有协同作用。
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