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雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook)是中药植物药物,其生物活性具有抗癌作用,雷公藤氯内酯醇(tripchlorolide,T4)是从雷公藤中提取的具有更低毒性和更强抗癌活性的药物。在本研究中,我们首先建立A549及A549/DDP非小细胞肺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射不同浓度T4,然后观察在T4作用下移植瘤的生长情况,检测LC3蛋白和PI3K/AKT/m TOR信号途径蛋白的表达水平,明确T4对肺癌皮下移植瘤的抑制作用和诱导自噬作用,探讨T4通过自噬抑制肺癌移植瘤生长的可能分子机制,为其临床应用提供理论依据。方法:1.建立A549及A549/DDP非小细胞肺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,T4低剂量组(0.05mg/kg),T4中剂量组(0.2mg/kg)和T4高剂量组(0.4mg/kg)。用游标卡尺分别测量裸鼠皮下移植瘤的长径(a)和短径(b),以公式V=0.5ab2计算移植瘤体积,绘制皮下移植瘤的生长曲线,实验结束后检测裸鼠肝肾功能,剥离瘤体称取移植瘤重量并计算各实验组抑瘤率。2.常规HE染色,观察非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤的病理形态;免疫组织化学检测各组皮下移植瘤中ki-67的表达情况。3.Western blot检测各组非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤中LC3蛋白和p62蛋白量,并通过透射电镜观察皮下移植瘤中的自噬体。4.Western blot检测各组非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤中PI3K,AKT,TSC2,m TOR,p70S6K,4E-BP1及磷酸化的PI3K,AKT,TSC2,m TOR,p70S6K,4E-BP1在肺癌皮下移植瘤中的表达水平。5.Western blot和Q-PCR检测裸鼠皮下移植瘤中MDR-1的蛋白水平和m RNA水平。6.通过组织块培养法培养各组皮下移植瘤中的原代细胞并分离纯化,免疫组织化学检测各组原代肺癌细胞中CK7,TTF-1和Napsin A的表达情况。7.通过CCK8检测各组原代耐药肺癌细胞对顺铂的敏感性。结果:1.T4对裸鼠的白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐和血葡萄糖之间的影响并无统计学差异。2.0.4mg/kg T4浓度组的皮下移植瘤生长速度与对照组相比显著下降;0.4mg/kg T4浓度组的抑瘤率与对照组相比显著提高;0.2mg/kg T4浓度组的皮下移植瘤的生长速度和抑瘤率与对照组相比没有统计学差异。3.0.4mg/kg T4浓度组T4干预过后的裸鼠,其皮下移植瘤中Ki-67表达显著减少。4.不管在A549裸鼠皮下移植瘤中,还是在A549/DDP裸鼠皮下移植瘤中,0.2mg/kg T4浓度组和0.4mg/kg T4浓度组与对照组相比,皮下移植瘤中的LC3II/LC3I比值明显升高,p62蛋白的表达水平降低;透射电镜观察发现经过T4处理的裸鼠皮下移植瘤组织中的自噬体数量明显增多。5.不管在A549裸鼠皮下移植瘤中,还是在A549/DDP裸鼠皮下移植瘤中,0.2mg/kg T4浓度组和0.4mg/kg T4浓度组与对照组相比,磷酸化的PI3K,AKT,m TOR,p70S6K和4E-BP1蛋白水平明显下降,磷酸化的TSC2蛋白水平明显升高。6.Western blot结果显示,在T4浓度为0.2mg/kg和0.4mg/kg时,MDR-1的蛋白水平和m RNA水平与对照组相比明显下降。7.免疫组织化学结果显示,原代细胞与A549/DDP非小细胞肺癌细胞中CK7,TTF-1和Napsin A的表达情况高度一致。8.在不同浓度的顺铂作用下,0.05mg/kg T4浓度组和0.2mg/kg T4浓度组的原代肺癌细胞的存活性与对照组相比没有统计学差异;0.4mg/kg T4浓度组的原代肺癌细胞的存活性与对照组相比,细胞活性明显下降,差异具有统计学意义。结论:1.T4抑制了非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤的生长。2.T4可能通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号途径诱导激活肺癌细胞的自噬。3.T4降低了A549/DDP非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤中MDR1的表达。4.T4改善了原代耐药肺癌细胞对顺铂的敏感性。