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胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的病原菌。本研究旨在利用大肠杆菌原核表达系统获得具有生物学活性的ApxⅠ重组蛋白并对其介导的宿主细胞毒性进行初步研究。首先,进行了APP ApxⅠA基因的生物信息学分析。ApxⅠA蛋白含有1023个氨基酸,属稳定的亲水性蛋白,无跨膜螺旋和信号肽;预测其二级和三级结构,富含α螺旋结构(469,45.85%),无规则卷曲(284,27.76%),还有延展链(193,18.87%)和β转角(77,7.53%);预测发现其第631-841位氨基酸为B细胞抗原表位密集区。其次,免疫制备了APP ApxⅠ多克隆鼠血清抗体。重组表达ApxⅠA’蛋白,将其皮下免疫小鼠3次获得免疫血清,间接ELISA检测其血清效价达到1:102400,通过免疫印迹证实能特异性识别ApxⅠA’重组蛋白。最后,表达并获得了具有溶血活性和介导细胞毒性的重组ApxⅠ蛋白。以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为表达菌,表达pET32a-ApxⅠCA质粒,获得ApxⅠ重组蛋白。90μg/ml该蛋白进行溶血实验能使1%绵羊红细胞完全溶解,证实其具有良好溶血活性;综合细胞形态学变化和CCK-8检测结果建立了以PAM为研究对象的重组ApxⅠ蛋白细胞毒性的细胞模型;50μg/ml的ApxⅠ重组蛋白刺激PAM细胞24h后,AO-EB染色可观察到细胞凋亡现象、Caspase-3的蛋白酶活力和mRNA的转录水平明显升高,证实本研究设定的低浓度该蛋白能通过细胞凋亡的方式介导细胞毒性。