论文部分内容阅读
番鸭呼肠孤病毒病(MDRV)和水禽流感病毒病(AIV)均是我国新出现的水禽传染病，严重影响水禽养殖业的健康发展。为阐明MDRV和H9亚型AIV导致的免疫抑制机理，本文通过人工感染的方式建立MDRV和H9AIV单独感染和混合感染8日龄雏番鸭模型，探讨不同病毒感染的形式对组织器官的损伤以及导致免疫组织器官细胞凋亡的机制。
1、应用组织病理学HE染色法，对感染后1d、3d、5d、7d和10d番鸭胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏、肾脏、大脑、胰腺、心脏、肺脏和肠道进行了动态病理学研究。结果表明，单独感染和混合感染均导致番鸭出现组织损伤，包括病毒性心肌炎、间质性肺炎、非化脓性脑炎、出血坏死性肾炎、坏死性脾炎、病毒性肝炎、出血性坏死性胰腺炎、坏死性肠炎等。H9亚型AIV感染器官组织充血、出血和比较轻微的实质细胞变性坏死；MDRV单独感染在肝脏、肾脏、脾脏等实质器官出现典型的局灶性坏死；混合感染组组织学损伤与MDRV相似，但典型组织学病变出现时间比MDRV组早，且损伤更严重，并兼有AIV单独感染时的出血、充血等病变特征。表明，AIV和MDRV混合感染具有不同程度的叠加损伤效应。
2、应用原位末端标记法(TUNEL)，测定感染后ld、3d、5d、7d和10d番鸭胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡的动态变化。结果：对照组细胞凋亡始终维持在一个相对低的水平；AIV，MDRV单独感染和混合感染均可导致雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏淋巴细胞凋亡增多；细胞凋亡主要见于病毒感染早期，感染后期各免疫器官细胞凋亡量出现不同程度的降低。H9AIV组细胞凋亡量均低于MDRV组和混合感染组。混合感染组脾脏、胸腺细胞凋亡尤为显著，分别在第1天、第3天出现峰值。表明，MDRV和AIV均能导致免疫器官细胞凋亡增多，混合感染组细胞凋亡更为明显。
3、应用免疫组织化学亲和素-生物素-过氧化物酶法（SABC法）测定感染后ld、3d、5d、7d和10d番鸭胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡因子P53动态变化。结果显示，对照组P53蛋白表达始终维持在一个相对低的水平，H9亚型AIV组表达高于对照组。MDRV组在法氏囊中P53表达量最高，混合感染组脾脏和胸腺P53表达均比单独感染高。提示AIV和MDRV单独感染和混合感染均能诱导蛋白p53过表达，促进细胞凋亡的发生。
4、应用免疫组织化学SABC法测定感染后1d、3d、5d、7d和10d番鸭胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡因子Bcl-2、Bax动态变化。结果：各病毒感染组Bcl-2蛋白表达均比对照组低，各病毒感染组Bax基因表达均高于对照组。Bcl-2Bax比值随凋亡的增加而降低，对照组两者比值均比病毒感染组高。表明Bcl-2Bax之间的动态变化与病毒诱导的细胞凋亡密切相关，MDRV和AIV单独感染和混合感染导致的细胞凋亡可以通过Bcl-2Bax介导的途径发生。
5、应用免疫组织化学SABC法测定感染后ld、3d、5d、7d和10d番鸭胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡因子Fas、Fasl动态变化。结果显示：对照组Fas、Fasl表达始终维持在一个相对低的水平，各病毒感染组Fas表达均明显高于对照组。H9亚型AIV组Fas表达低于MDRV组和混合感染组。MDRV单独感染组和混合感染组之间Fas表达差异性不显著。Fasl表达量MDRV组高于AIV组，混合感染组表达量均高于单独感染组。表明凋亡因子Fas和Fasl表达量随着组织免疫细胞凋亡的增加而增加，MDRV和AIV单独感染和混合感染导致的细胞凋亡可以通过FasFasl介导的途径发生。
综上所述，8日龄番鸭感染H9亚型AVI后，组织损伤轻微，表现为一过性损伤，免疫器官细胞凋亡轻微，后期与对照组差异不显著。MDRV感染导致番鸭死亡，出现严重的组织损伤，免疫器官细胞凋亡明显。AIV和MDRV混合感染出现高死亡率，组织兼有AIV和MDRV的叠加损伤，免疫器官细胞凋亡高于AIV和MDRV单独感染。随免疫器官细胞凋亡增加凋亡因子P53，Fas，Fasl的表达逐渐增多；Bcl-2/Bax比值与免疫器官细胞凋亡变化呈负相关。表明混合感染在组织损伤和免疫器官细胞凋亡均具有不同程度的叠加效应，凋亡因子P53，Fas，Fasl，Bcl-2，Bax在病毒感染导致免疫细胞凋亡的发生、发展过程中发挥着重要的作用。