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[背景和目的]人类杯状病毒(Human Caliciviruses, HuCVs)包括诺如病毒(Norovirus, NV)和札如病毒(Sapovirus, SAV),是引起全世界人类非细菌性急性胃肠炎暴发的主要病原,也是仅次于轮状病毒引起婴幼儿急性腹泻散发的常见病原之一诺如病毒又称诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus),最初由Kapikian等在1972年通过免疫电镜的方法从美国俄亥俄州诺瓦克镇一起非细菌性胃肠炎暴发的患者粪便中分离得到；札如病毒(Sapovirus, SAV)以前称札幌样病毒(Sapporo-like virus),因最初于1977年在日本札幌市被发现而命名,是人和猪非细菌性急性胃肠炎的主要病原体之一。长期以来,由于对杯状病毒缺乏简易、敏感的检测手段,使其导致人类患病的危害被严重低估。近年来,随着对杯状病毒分子流行病学研究的深入,其重要性和危害性正逐渐被全面、系统的认识。2005年1月,加拿大和美国相继宣布暴发NV感染,引起了人们的广泛关注。2006年11月,日本、新加坡、意大利等地相继发生了NV集体感染事件,特别是日本暴发了25年来最严重的传染性胃肠炎疫情,不到两个月累计发生35.76万人感染NV,引起了全球的广泛关注。同期我国包括北京、广东佛山、福建等省市均出现NV疫情,据全国病毒性腹泻监测网对11个省份5岁以下腹泻儿童的监测,NV检出率为15%左右。由于该病毒传染性很强,常可导致突发性公共卫生事件,美国已将其列为乙类生物恐怖因子。美国疾病控制中心(CDC)最新估计,96%的非细菌胃肠炎暴发与NV有关,而SAV则是婴儿和小龄儿童病毒性腹泻的主要病原体。我国对诺如病毒的研究起步较晚,1995年方肇寅等首次在我国婴幼儿腹泻粪便标本中检测到诺如病毒。此后,北京、长春、河北、兰州、广州、福州等地均在儿童腹泻粪便标本中检出NV。最近方肇寅等人在对1999年至2005年来自我国13个地区的婴幼儿腹泻粪便HuCVs研究中其阳性率为8.3%-38.6%,主要以NV为主,检出率仅次于RV,表明我国AGE病例中NV感染也相当普遍。札如病毒在世界各地都有报道,2005年2月,日本某幼儿园中23人(包括6名成人)感染SAV病毒。我国上海交大华修国等于2008年在国内不明原因腹泻人群与腹泻仔猪体内分离到一种新的杯状病毒,经过鉴定和动物回归实验证明该病毒为SAV。目前,国际上SAV的总体研究水平还处于起步阶段。虽然杯状病毒感染在我国普遍存在,但是浙江地区杯状病毒感染的分子流行特征尚缺乏系统研究,因此,研究杯状病毒在浙江地区的分子流行病学规律、流行毒株特征及进化情况,可以为本地区杯状病毒引起的急性腹泻的防治提供科学依据,对我国急性腹泻的预防控制工作也具有重要意义。[对象和方法]1.研究对象2009年1月至2011年1月来自浙江地区5个哨点医院肠道门诊(包括杭州、宁波、绍兴、湖州、衢州)就诊的急性腹泻患者3153例,包括5岁以下婴幼儿和成人。每日腹泻次数超过3次或大便性状出现明显异常(水泻样、蛋花汤样、粘液样或粘糊样)定义为腹泻病例。2.实验方法2009-2011年监测期间连续收集以上3153例急性腹泻患者的粪便标本,并同时进行调查,填写调查表,电话随访完善调查表。对收集的标本采用多重PCR方法进行轮状病毒(RV)、杯状病毒(NV和SAV)等病毒检测,并选取部分扩增后的杯状病毒阳性产物进行序列测定,应用DNAMAN(5.1.0.0)和MEGA4.0软件对杯状病毒和相关参考株进行序列的多重比对和系统进化分析。[结果]1.2009年1月至2011年1月,本研究共检测浙江地区3153份急性腹泻标本,杯状病毒检出率较高,为18.42%,仅次于轮状病毒的检出率(20.10%)。2.诺如病毒共检出265份(12.36%,265/2144；52份为NV-G基因型,213份为NV-GⅡ基因型)；札如病毒检出率为6.06%(130/2144)。<5岁组检出率最高,其次是15-65岁组,5-15岁组检出率最低。浙江地区急性腹泻患者中杯状病毒感染全年均有发生,以冬春季节(11-4月)感染较多,另外夏季(6-8月)检出率也相对较高。3.随机抽取15株诺如病毒和10株SAV进行测序分析,NV基因型别包括：G Ⅰ-1(3株)、G Ⅰ-2(1株)、G Ⅱ-4/2006b变异株(7株)、G Ⅱ-2(1株)、G Ⅱ-7(1株)和G Ⅱ-4/2008变异株(2株)；SAV基因型别包括：G Ⅰ-2(5株)、G Ⅰ-1(4株)和G Ⅱ-1(1株)。[结论]1.杯状病毒是浙江地区引起急性腹泻的一个重要病原,仅次于轮状病毒的检出率,且诺如病毒检出率高于札如病毒。该病毒主要感染五岁以下婴幼儿,冬春季节为感染高发季节。2.浙江地区急性腹泻患者杯状病毒感染呈现遗传多样性特征,诺如病毒在浙江地区包括GI-1、GI-2、GⅡ-2、GⅡ-7、GⅡ-4五个基因型,GⅡ-4/2006b可能是本地区的流行优势株；札如病毒包括G Ⅰ-2、G Ⅰ-1和G Ⅱ-1三个基因型,G Ⅰ-2基因型是流行优势株。