微小按蚊A、C的分类、群体遗传结构和生态习性的研究

来源 :中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maozi100
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目的①在微小按蚊复合体精确分类的基础上,系统比较微小按蚊A、C形态、同工酶和染色体差异。②对云南不同地区微小按蚊A、C进行群体遗传结构的研究。③比较研究微小按蚊A、C生态习性。方法①收集云南不同地区微小按蚊的现场标本,采用PCR-RFLP和PCR-ASA或复合PCR方法进行分子鉴别。②对经复合PCR鉴别,疑为微小按蚊杂合子的样本,以PCR-ASA、PCR-RFLP和D3序列的测定进行验证。③应用解剖镜、光学显微镜和扫描电镜对已分子鉴别的子一代标本加以形态学检视;垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳进行同工酶检测;制备染色体核型标本并观察。④对不同地理来源的现场标本采用SSR-PCR方法非特异扩增,根据扩增条带,运用BIOSIS、RAPDFST、RAPDDIST、PHILIP等软件计算基因位点多态性,FST、θ、迁移率以及遗传距离,构建系统树;以EXCEL对地理距离和遗传距离的相关性进行统计分析。⑤比较微小按蚊A、C在人房和牛房的栖息比例;抽样检测,推导微小按蚊A、C的种群密度高峰;ELISA和环状沉淀实验检测现场吸血蚊的胃血来源。结果①微小按蚊A、C蚊翅V2.1白斑具有稳定差异;同工酶EST具有鉴别微小按蚊A、C的差异条带;微小按蚊A、C染色体核型不同主要表现在性染色体,根据长短臂之比以及异染色质分布的不同,微小按蚊A性染色体为X1、X2、Y1,微小按蚊C为X3、Y2。②发现了微小按蚊A/C杂合子,其复合PCR、PCR-ASA、PCR-RFLP电泳图谱既显示微小按蚊A的条带,又显示微小按蚊C的条带,D3序列峰图在微小按蚊A、C的所有变异位点均出现杂合峰信号,即同时具有微小按蚊A和C相应碱基的峰信号。③云南不同地区微小按蚊均共享较高多态性,固定指数分析(FST和θ)提示微小按蚊的遗传变异主要存在于种群内部,其种群间的迁移率(Nm)无论是将微小按蚊A、C分别还是合并分析均大于1。聚类分析所得系统树图主要分为两支,元江、大关和勐腊的微小按蚊C聚为一支,另一支分为三层,既有微小按蚊A又有微小按蚊C,分别为元江微小按蚊C与勐腊微小按蚊A,新平微小按蚊A和临沧微小按蚊C,潞西的微小按蚊A独立为一层。地理距离与遗传距离相关性分析,P>0.05。④无论人房或牛房,微小按蚊C的比例均高于微小按蚊A,但微小按蚊A和C的构成比例在人房和牛房之间并无差异(p<0.05)。微小按蚊A的种群密度高峰出现在9月,微小按蚊C的种群密度高峰出现在7月,二者种群密度高峰的出现均会引起当地疟疾病例数的增加。微小按蚊A和C吸血蚊中,吸人血比例分别为19.1%和12.5%,微小按蚊A略高,但并无统计学意义(p>0.05)。结论我国微小按蚊A、C的形态、同工酶和染色体核型均存在一定差异,在自然群体中存在杂合子。云南不同地区微小按蚊遗传距离与复合体分类部分相关,未发现与地理距离相关。除种群密度高峰出现时间不一外,尚未发现微小按蚊A、C生态习性有差异。
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