论文部分内容阅读
目的: 观察电针对干眼症(Dry eye syndrome，DES)患者临床症状、眼表功能、生活质量及情绪的影响，研究分析电针对眼结膜细胞炎性因子表达的调节作用，探讨电针治疗DES的临床疗效及其对眼表功能的改善机制。通过观察电针对实验性DES兔泪量、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色及组织病理学的影响，探讨电针对实验性DES兔眼表功能及组织损伤的作用;通过研究电针对实验性DES兔结膜、泪腺TLRs/NF-κB信号通路关键蛋白的作用，阐释电针治疗实验性DES的信号转导机制。 方法: ①临床研究:符合纳入标准的DES患者随机分为电针组和针刺组，针刺组穴位选取攒竹(BL2)、丝竹空(SJ23)、太阳(EX-HN5)、四白(ST2)、百会(DU20)、风池(GB20)、合谷(LI4)、足三里(ST36)、光明(GB37)、三阴交(SP6)、太冲(LR3)，均采用单纯针刺治疗。电针组在针刺治疗的基础上，加用电针治疗，取攒竹、太阳穴连接电针，采用连续波，频率2Hz。两组患者均每次治疗30分钟，每周治疗3次，共治疗12次。分别于治疗前和治疗后观察患者的临床症状和眼表疾病指数，测定泪量、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色评分及角膜知觉，运用蛋白芯片技术分析研究电针治疗前后DES患者结膜细胞中炎性因子的表达。 ②动物实验:24只新西兰兔随机分为正常组、模型组、电针组、假电针组，除正常组外，其余三组均给予0.1％苯扎氯铵溶液滴眼制备实验性DES模型，电针治疗组选取双侧攒竹、太阳、丝竹空、风池穴予针刺治疗，攒竹、太阳穴连接HANS电针仪，采用连续波，频率2Hz，电流强度2mA;假电针组选穴同上，进针透皮即止，攒竹、太阳穴连接HANS电针仪但不通电。两组留针20分钟/次，1次/天，连续治疗7天。治疗结束后，检测各组泪量、泪膜破裂时间和角膜荧光素染色评分，采用HE染色观察结膜、泪腺形态学变化，应用PAS染色观察结膜杯状细胞数量，运用ELISA技术测定结膜组织TNF-α、IL-6、IL-1β含量，采用荧光定量PCR技术检测结膜、泪腺组织中TLR1，2，4，6及TLR信号通路相关蛋白MyD88、TIRAP、IRAK4、NF-κB p65 mRNA的表达。 结果: ①临床研究:针刺组完成37例，脱落1例;电针组完成38例，脱落0例。电针组临床总有效率为59.21％，优于针刺组41.98％(P＜0.05)。与治疗前比较，针刺组、电针组患者治疗后眼表疾病指数均明显降低(均P＜0.01)。与治疗前比较，针刺组患者治疗后泪液分泌增加（P＜0.05），电针组患者治疗后泪液分泌明显增加(P＜0.01)，与针刺组比较，电针组患者治疗前后泪液分泌量差值显著增加（P＜0.05）。与治疗前比较，针刺组、电针组患者治疗后泪膜破裂时间延长（均P＜0.01），与针刺组比较，电针组患者治疗前后泪膜破裂时间差值显著增加(P＜0.05)。与治疗前比较，针刺组、电针组患者治疗后角膜荧光素染色评分明显降低，角膜知觉改善(均P＜0.01，P＜0.05)。与治疗前比较，针刺组、电针组患者治疗后生活质量（生理职能、总体健康、情感职能、心理健康）明显改善(均P＜0.01)。与治疗前比较，针刺组、电针组患者治疗后焦虑评分降低(均P＜0.05)，两组患者治疗后抑郁评分有下降趋势，无显著性差异（均P＞0.05）。蛋白芯片的结果提示治疗前后电针组患者结膜细胞中TNFR I、IL-1ra、PANTES、Eotaxin-2、I-309、MIP-1a、IL-1b、IL-6sR、MIP-1b、TIMP-1有显著性差异;与针刺组比较，电针表现为同向调节效应的因子有MIP-1a、MIP-1b、PANTES，表现为反向调节效应的因子有IL-6sR、IL-1b、TIMP-1、I-309。 ②动物实验:与正常组比较，DES模型兔泪量和泪膜破裂时间均降低，角膜荧光素染色评分显著升高（均P＜0.01），兔结膜、泪腺组织光镜下可见炎症、水肿和部分腺体细胞萎缩。与模型组、假电针组比较，电针组兔泪液分泌量和泪膜破裂时间明显增加，角膜荧光素染色评分降低(均P＜0.01)，兔结膜和泪腺组织损伤呈现了不同程度修复。与正常组比较，DES模型兔结膜杯状细胞数量明显减少，结膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量增加（均P＜0.01）。与模型组、假电针组比较，电针组兔结膜组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达明显降低（均P＜0.01）。与正常组比较，DES模型兔结膜、泪腺中TLR1，2，4，6 mRNA表达异常增加（均P＜0.01）。与模型组、假电针组比较，电针组兔结膜、泪腺中TLR1，2，4，6mRNA含量显著降低（均P＜0.01）。与正常组比较，DES模型兔结膜和泪腺组织中TLR信号转导通路蛋白MyD88、TIRAP、IRAK4 mRNA表达增加（均P＜0.01）。与模型组、假电针组比较，电针组兔结膜和泪腺组织中信号转导通路蛋白MyD88、TIRAP、IRAK4mRNA表达降低（均P＜0.01）。与正常组比较，DES模型兔结膜组织中NF-κB p65mRNA表达增加(P＜0.01)。与模型组、假电针组比较，电针组兔结膜组织中NF-κBp65 mRNA表达则明显降低(P＜0.01)。 结论: 1.电针和单纯针刺均能一定程度上改善DES患者的临床症状、眼表功能、生活健康质量及情绪症状。 2.电针治疗DES的临床疗效优于单纯针刺治疗，在改善泪液分泌和稳定泪膜方面，电针优于单纯针刺。 3.电针和单纯针刺治疗对干眼症患者眼结膜细胞局部的炎性细胞因子均有一定的调节作用，但调节的靶点不尽相同。 4.电针能改善实验性干眼症兔眼表功能、促进结膜、泪腺组织损伤的修复。 5.电针能降低实验性干眼症兔眼结膜中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。 6.电针能下调实验性干眼症兔结膜、泪腺组织中TLR1，2，4，6 mRNA表达，降低TLR信号通路关键蛋白MyD88、TIRAP、IRAK4、NF-κB p65 mRNA的表达，进而抑制炎性细胞因子的表达，达到改善炎症、修复结膜和泪腺组织损伤之目的。