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目的：为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题，原核表达由人骨保护素(OPG)功能片段和结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白(HSP)65功能片段组成的OPG—HSP65重组蛋白，鉴定其生物学活性，研究其对佐剂型关节炎(AA)大鼠的保护性作用，并初步探讨其作用机制。
方法：通过PCR法获得OPG、OPG—HSP65重组基因，构建原核重组质粒pET—28a—OPG、pET—28a—OPG—HSP65，将其转化大肠杆菌E.coli.BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白，以十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹鉴定该重组蛋白的表达。对重组蛋白进行尿素洗涤及凝胶过滤纯化，进而透析复性。以体外功能实验即破骨细胞生长抑制试验和抑炎试验来检测该重组蛋白的生物学活性，以该重组蛋白注射AA大鼠的体内试验来检测其对关节炎的保护作用。
结果：OPG功能区DNA片段、OPG—HSP65重组DNA片段被正确插入到pET—28a载体中；转化菌株可表达OPG功能区蛋白和OPG—HSP65重组蛋白；SDS-PAGE电泳分析显示在蛋白分子量约为21KD及23KD处有蛋白的超表达，而未诱导菌株未发现有此条带；蛋白免疫印迹检测表明此两种蛋白均能与抗His·Tag单克隆抗体及鼠抗人OPG单克隆抗体特异性结合；破骨细胞生长抑制试验中两种蛋白均能够减少破骨细胞的生成数量：抑炎试验中OPG—HSP65重组蛋白实验组小鼠耳朵肿胀程度显著减轻，脾脏表达炎性细胞因子TNF-α、IFN—γ、IL-17的mRNA水平明显下降；OPG—HSP65重组蛋白在AA大鼠的体内试验中，OPG—HSP65重组蛋白实验组大鼠体重减轻缓慢，关节炎指数下降，脾脏表达IL-17、RANKL的mRNA水平明显下降，骨影像学观察骨损伤不明显，骨密度下降不显著。
结论：成功构建出pET—28a—OPG、pET—28a—OPG—HSP65重组质粒，在E.coli.BL21(DE3)中成功表达出OPG功能区蛋白及OPG—HSP65重组蛋白，体外功能试验证实该重组蛋白具有抑制破骨细胞生长和炎症反应的生物学活性，体内试验表明该重组蛋白对从大鼠具有保护性作用。