【摘 要】
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该实验室从棉铃虫卵巢中纯化得到了一种蛋白酶,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为30kDa,根据其能被半胱氨酸蛋白酶的特异性抑制剂E-64抑制,鉴定出这是一种半胱氨酸蛋
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该实验室从棉铃虫卵巢中纯化得到了一种蛋白酶,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为30kDa,根据其能被半胱氨酸蛋白酶的特异性抑制剂E-64抑制,鉴定出这是一种半胱氨酸蛋白酶,又通过对其氨基酸N端序列的测定确认它属于组织蛋白酶B.该文在前人工作的基础上,利用从大肠杆菌BL21菌株中纯化得到的重组表达的棉铃虫组织蛋白酶B免疫家兔,制备了兔抗HCB抗血清,该抗血清不但识别大肠杆菌中表达的重组棉铃虫组织蛋白酶B,还可以识别Pichia酵母、昆虫细胞表达的重组棉铃虫组织蛋白酶B以及棉铃虫卵巢匀浆液内的组织蛋白酶B.通过免疫印迹法检测到棉铃虫卵、幼虫血淋巴、中肠、表皮、脂肪体、雌、雄蛹脂肪体、雌性成虫卵巢、脂肪体和雄性成虫脂肪体中有棉铃虫组织蛋白酶B的分布.原位水解的结果显示只有棉铃虫卵、卵巢和雌性成虫脂肪体中的棉铃虫组织蛋白酶B具有水解蛋白的活性.同时,我们制备了不同性别、不同发育时期的棉铃虫各组织的组织切片,通过免疫组织化学法对棉铃虫组织蛋白酶B进行了组织定位,结果显示棉铃虫幼虫中肠、表皮雌蛹脂肪体、雌性成虫卵巢、脂肪体和雄性成虫脂肪体中有较深的颜色反应.从结果中还可以看出,在棉铃虫表皮的细胞和几丁质层中都有组织蛋白酶B存在;卵巢组织中,滤泡细胞细胞质中有均匀的颜色反应,在滤泡细胞膜表面有较深的颜色反应,说明组织蛋白酶B均匀分布于滤泡细胞细胞质中,在细胞膜上有较多的分布,另外卵黄颗粒表面也有颜色反应,因此棉铃虫卵母细胞中也有组织蛋白酶B的分布.该实验探明了组织蛋白酶B在棉铃虫体内的组织分布,并对其进行了组织定位,有助于今后对棉铃虫组织蛋白酶B的功能和调控机制的研究.
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