鳗弧菌基因缺失株MVAV6203冻干产品的制备

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鳗弧菌是世界上海洋和淡水鱼类动物传染性疾病的一种重要病原菌。可导致一种包括鲑鱼、鳗鱼等许多鱼类高度致死性的出血性败血病,病死率很高,给水产养殖业带来巨大的经济损失。利用疫苗防止鱼类鳗弧菌病害具有重要意义,也是国际上的研究热点。 本文应用生物反应器技术,对鳗弧菌MVAV6203基因缺失株进行培养。实验结果证明,本菌株生长必需酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等芳香氨基酸,在5L生物反应器中,通过改变补料方式及补料基质,控制流加速率,使得菌体最大活菌数为4.6×1010CFU/ml。鳗弧菌MVAV6203是一种对冷冻干燥过程敏感的菌株,在不含保护剂的条件下其冻干存活率非常低,采用蔗糖,海藻糖,脱脂牛奶等保护剂后,菌体存活率可得到很大提高,预冻温度、初始菌浓和复水介质对菌体存活率也有重要影响,当MVAV6203在初始菌浓为1.6×1010CFU/ml,-80℃超低温预冻与最佳保护剂条件下冻干,并用最佳复水介质复水时,菌体存活率达到最大值51.4﹪,冻干品在4℃下保藏6个月,活菌数下降小于20﹪。经检测,鳗弧菌MVAV6203基因缺失株的半致死量较MVM425野生株高4个数量级,作为疫苗株使用时,该菌对牙鲆具有很高的免疫保护率,且不会对鱼体造成副作用。在200代以内,菌株基因保持很高的稳定性,不发生回复突变和毒力返强现象。
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