兔Epi-LASIK上皮瓣对角膜基质TGF-β、bFGF表达及细胞凋亡影响的实验研究

• 作 者: 陈艳蕾
• 机 构: 南方医科大学
• 出 处: 南方医科大学
• 发表日期: 2008年3期
• 关键词: 角膜创伤

研究背景：
Epi—LASIK(epitheliallaserinsitukeratomileusis，机械法激光上皮下角膜磨镶术)具有良好的安全性、有效性、可预测性和稳定性。但是，与LASIK(laserinsitukeratomileusis，激光原位角膜磨镶术)相比，Epi—LASIK术后患者视力恢复慢、术后疼痛，尤其是haze(上皮下雾状混浊)的发生率较高成为制约其应用的主要因素。
Haze的产生伴随于角膜创伤愈合修复过程，近年来关于角膜创伤愈合修复的研究认为：上皮细胞的损伤可以引起基质细胞凋亡；角膜基质细胞凋亡是启动修复过程的主要因素；修复过程中伴随多种细胞因子如TGF-β1、bFGF等的协同作用。还有研究认为LASEK术后角膜上皮的愈合是自外而内上皮细胞分裂增殖的重新覆盖。综合多项研究结果，Epi—LASIK术中保留的上皮瓣可能是引起基质细胞凋亡从而启动角膜创伤愈合修复过程的因素之一，因此对于Epi—LASIK上皮瓣在角膜创伤愈合修复过程所起的作用值得进一步探讨。
第一部分：Epi-LASIK与LASEK上皮瓣细胞培养及增殖能力检测
目的:探讨激光上皮下角膜磨镶术(laser—assistedsubepithelialkeratomileusis，LASEK)与机械法激光上皮下角膜磨镶术(epitheliallaserinsitukeratomileusis，Epi—LASIK)后角膜上皮愈合方式。
方法:取行LASEK及Epi—LASIK的人角膜上皮瓣各20例、兔角膜上皮瓣各12例，和兔角膜缘组织12例，采用细胞法和组织块法进行上皮瓣细胞及角膜缘细胞培养，并采用可溶性噻唑盐(WST—8)法检测和比较细胞增殖能力。采用SPSS11.5软件应用独立样本t检验和单向方差分析对数据进行统计学分析。
结果:对人和兔上皮瓣细胞连续观察2周，仅见少量细胞生长或未见细胞生长，人LASEK组细胞增殖能力较Epi—LASIK组低，两组差异具有统计学意义(t=3.907,P=0.000)，兔LASEK组细胞增殖能力较Epi—LASIK组低，两组差异无显著性(P=0.255)，兔LASEKa、Epi—LASIKb组细胞增殖能力均低于角膜缘组且差异均具有统计学意义(Pa=0.000,Pb=0.005)。
结论:离体上皮瓣细胞增殖能力低下，且LASEK上皮瓣细胞增殖能力低于Epi—LASIK，从细胞增殖能力的角度分析显示LASEK和Epi—LASIK术后角膜创伤愈合过程并非依靠角膜上皮瓣的原位生长，而是以角膜缘干细胞的分裂增殖为主导。
第二部分：兔Epi-LASIK上皮瓣对角膜基质TGF-β1、bFGF表达及细胞凋亡的影响
目的:比较兔Epi—LASIK去除上皮瓣和保留上皮瓣对于转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在角膜基质的表达及基质细胞凋亡水平的不同，探讨上皮瓣对角膜创伤愈合过程的影响。
方法:45只新西兰大白兔，3只作为阴性对照，21只行传统Epi—LASIK保留上皮瓣，余21只行Epi—LASIK去除上皮瓣。分别于术后4小时、1日、3日、5日、7日、15日、30日每组各取6眼，通过免疫组织化学法和末端转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(terminaldeoxynucleotidyltransferase—mediateddUTPnick—end—labeling,TUNEL)，对角膜基质TGF-β1、bFGF的表达及基质细胞凋亡水平进行检测，并观察各组术后角膜上皮愈合情况和haze的发生及程度。采用SPSS11.5软件应用x2检验、独立样本t检验和重复测量数据方差分析对数据进行统计学分析。
结果:留瓣组在角膜基质TGF-β1、bFGF表达及基质细胞凋亡水平方面均高于去瓣组，两组基质细胞凋亡水平的差异具有统计学意义(F=5.452.P=0.042)，角膜基质TGF-β1a、bFGFb的表达水平两组差异无显著性(Fa=0.552，Pa=0.475；Fb=1.602，Pb=0.234)；留瓣组上皮愈合时间较去瓣组长，两组差异无显著性(t=0.640，P=0.526)；两组均于术后3日出现1级haze，术后5日、7日haze发生率及程度升高，术后15日haze减轻，术后30日haze消失，其中术后3日留瓣组haze发生率高于去瓣组，差异具有统计学意义(x2=4.269，v=1，P=0.039)。
结论:Epi—LASIK上皮瓣原位保留增加基质细胞凋亡水平和术后haze发生程度，上皮瓣是角膜创伤愈合修复过程的负性影响因素之一。