P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒转染人膀胱癌细胞T24的研究

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该研究以非脂质体转染试剂FuGENE6为介导,将可在真核细胞内表达的P53基因质粒和反义c-myc基因质粒转染人膀胱癌细胞T24,了解其对肿瘤细胞增殖率的改变、死亡特征、P53基因和c-myc基因表达水平以及它们的作用机理,为人膀胱癌的基因治疗提供理论与实验依据.该文还以人肝癌细胞Hep3B为对照,研究P53基因质粒和反义c-myc基因质粒对Hep3B细胞的影响.另外,还用带有野生型P53基因和绿色荧光蛋白基因GFP的重组质粒pCEP4-P53-GFP分别转染T24细胞和Hep3B细胞,更加直观地了解P53基因质粒对两种细胞生长的影响效果.P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒转染T24细胞取得较好的效果.为进一步探索其作用机理,又进行了一系列实验研究并获得了如下结果和结论:DNA测序结果表明转染所用P53基因和反义c-myc基因的序列与文献报道一致,没有突变或缺失等异常,PCR-异双聚体PAGE电泳实验证明T24细胞的P53发生了点突变;SouthernBlot确证P53基因和反义c-myc基因经FuGENE6介导转入靶细胞;Western Blot方法检测野生型P53在靶细胞内表达P53蛋白;ELISA方法检测瘤细胞内c-myc表达产物的含量水平下降;Caspase3活性检测结果表明其活性显著增加,表现为典型的凋亡特征.
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