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细胞凋亡(apoptosis)是基因控制的细胞的生理性死亡方式,研究表明人类多种疾病与细胞凋亡不当有关.半胱氨酸蛋白酶家族(caspases)在细胞凋亡中起着重要作用,其中caspase-3是U937、HL-60、PC-12等多种细胞凋亡时蛋白酶级联反应的下游关键蛋白酶.该教研室以前的研究发现,γ-射线照射后的HL-60细胞死亡的主要方式是细胞凋亡,并且已经利用caspase简并引物克隆出了caspase-3基因片段;进一步的研究发现反义寡核苷酸(ASODY)能有效阻止γ-射线照射的HL-60细胞形成DNA梯状带.该实验通过观察细胞凋亡率、caspase-3蛋白和caspase-3mRNA的表达水平,进一步探索ASODN对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡的抑制作用及其机制,并且筛选有效的ASODN.结论:1.γ-射线照射诱导HL-60细胞凋亡时,细胞内caspase-3及其mRNA表达增加,且caspase-3阳性细胞率大于对应组的细胞凋亡率,表明caspase-3在该细胞凋亡中发挥重要作用.2.caspase-3mRNA ASODN能够抑制γ-射线照射诱导的HL-60细胞凋亡,降低细胞凋亡率,下调caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表达水平,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性.3针对caspase-3m RNA5-非编码区的ASODN的凋亡抑制作用强于翻译起始区的ASODN.该结果为细胞过度凋亡相关疾病的基因治疗提供了实验基础.