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布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人兽共患传染病,主要经消化道、呼吸道和泌尿生殖黏膜以及皮肤伤口感染,引起母畜流产和人的“波浪热”等疾病。大量研究证明,巨噬细胞是布鲁氏菌的易感细胞。巨噬细胞被布鲁氏菌感染后,由于布鲁氏菌在其胞内生存并大量繁殖,使它的抗原提呈能力丧失,不能提呈布鲁氏菌的抗原,从而使免疫功能遭到破坏,导致持续性感染的发生。因此,如何帮助患病动物建立有效的免疫应答机制是当前一个重要的研究课题。适应性免疫应答的启动需夏树突状细胞(dendritic cells,DCs)的抗原提呈,不仅如此,DCs还能交叉提呈非复制性抗原,故被称为机体最强大的抗原提呈细胞,但目前尚不清楚DCs是否提呈布鲁氏菌抗原及其可能的机制。为探明阴道黏膜DCs是否参与布鲁氏菌抗原提呈,研究者模拟自然感染途径给BALB/c小鼠阴道接种了布鲁氏菌冻干疫苗,然后,比较不同时间内阴道引流淋巴结内DCs的动力学变化。结果发现,与对照组相比,接种布鲁氏菌冻干疫苗12h后,小鼠髂内淋巴结中的DCs数量开始增多,散在分布于皮质区;48h后阴道黏膜DCs向髂内淋巴结的迁移达到顶峰,在淋巴结T细胞区聚集,此时细胞密度较大,多个细胞簇拥成团;72h后虽然DCs,分布区域加大,但细胞密度相对于48h降低,大量DCs呈单个分布。而对照组未见类似改变。同时,用ELISA法对阴道接种布鲁氏菌冻干疫苗的小鼠血清中IFN-γ水平进行了检测,结果显示,接种疫苗12h后,小鼠血清内的IFN-γ含量就开始升高,但与对照组相比差异不显著(P＞0.05),而48h后,接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量明显升高,与对照组相比,差异显著(22.2140±2.3056pg/mL,P＜0.05)。在接种72h后,接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量达到最高峰,与对照组相比,差异极显著(23.6507±1.4727 pg/mL,P＜0.01)。以上结果表明,阴道黏膜DCs就是布鲁氏菌抗原的提呈细胞。由于巨噬细胞是野生型或疫苗布鲁氏菌的主要吞噬细胞,所以,为了进一步探讨DCs提呈布鲁氏菌抗原的机制,研究者采取了清除BALB/c小鼠阴道巨噬细胞的处理方法,以便为树突状细胞提供更多捕获布鲁氏菌抗原的机会,并模拟自然感染途径,阴道接种了布鲁氏菌疫苗,然后,比较不同时间内阴道引流淋巴结内DCs的动力学变化。对照组(即阴道滴注PBS-liposome组)接种布鲁氏菌冻干疫苗12h后,小鼠髂内淋巴结中DCs数量开始增加,散在分布于皮质区。24h后淋巴结内DCs散在分布于副皮质区,在48h后,DCs向髂内淋巴结副皮质区的迁移达到顶峰,至72h,髂内淋巴结内DCs的数量有所下降,在皮质区和副皮质区内呈现散在分布状。实验组(即阴道滴注Clodronate-liposome组)接种布鲁氏菌冻干疫苗,髂内淋巴结内DCs的数量没有明显变化。同时,用ELISA法对阴道接种布鲁氏菌冻干疫苗不同时间的小鼠血清IFN-γ和IL-4水平均进行了检测。结果显示:对照组的小鼠接种疫苗12h后,血清内的IFN-γ含量有所升高,但与PBS组相比其差异均不显著(P＞0.05);而24h后,接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量明显升高,与PBS组相比,差异显著(48.7508±2.4373 pg/mL,P＜0.05);48h后含量达到最大,差异极显著(52.3050±2.3262pg/mL,P＜0.01);而在接种72h后,接种疫苗组小鼠血清内的IFN-γ含量虽降低,但与PBS组相比,差异还是显著(51.5511±2.0772pg/mL,P＜0.05)。实验组小鼠接种疫苗12h、24h、48h和72h后,血清内的IFN-γ含量升高,但与PBS组相比其差异均不显著(P＞0.05)。在对照组和实验组中,接种疫苗12h～72h组小鼠血清内的IL-4含量与PBS组相比,差异均不显著(P＞0.05)。以上结果说明,DCs虽然是布鲁氏菌的抗原提呈细胞,但其抗原提呈过程具有巨噬细胞依赖性特征,并且主要引起Th1型免疫应答。为阐明DCs提呈布鲁氏菌抗原对巨噬细胞的依赖本质,研究者进行了体外布鲁氏菌疫苗荷载BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的试验(500CFU/巨噬细胞),经姬姆萨染色,镜下观察,结果发现,在荷载布鲁氏菌疫苗2h后,巨噬细胞内出现被吞噬的布鲁氏菌,尔后在6h～12h期间,其胞内细菌数量增多,到12h后,巨噬细胞出现质膜破裂、胞质脱落和细胞核固缩的现象。这表明巨噬细胞可能以细胞碎片或膜包小泡的方式向DCs传递抗原。从以上结果可以得出如下结论:阴道黏膜DCs是布鲁氏菌的抗原提呈细胞,其提呈布鲁氏菌抗原的过程具有巨噬细胞依赖性,并且主要诱导Th1型细胞免疫应答。