不同时期视网膜免疫赦免相关抗原的实验研究

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目的:神经视网膜是免疫赦免组织,由于新生期视网膜尚未完全分化,故表达的免疫赦免相关抗原低于成年期视网膜,这为视网膜移植时减少免疫排斥反应提供了途径.本研究通过四种免疫赦免相关抗原在不同鼠龄小鼠神经视网膜上的不同表达来阐明新生期神经视网膜、尤其新生期视网膜神经母细胞较成年期视网膜具有更低的免疫原性,成年期光感受器细胞也具有较低的免疫原性,均适宜做为视网膜移植时的供体材料.[方法]1.取新生1天、3天、1周、4周和10周C57BL/6小鼠各三只,分别取出双眼球后行常规冰冻切片.将冰冻切片行HE染色、FasL、CD45、MHC-Ⅰ及MHC-Ⅱ免疫组织化学染色.2.取20只新生1天的C57BL/6小鼠及10只10周的C57BL/6小鼠,分别取出双眼球,体式显微镜下分离各组神经视网膜,将其制备成悬液.将视网膜神经细胞用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养,置于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养48小时.重复培养4次.3.使用抗MHC-Ⅰ、抗MHC-Ⅱ、抗FasL及抗CD45流式抗体分别与培养的视网膜神经细胞孵育,每组在相同的条件下用流式细胞仪各检测24次.
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