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放射治疗是鼻咽癌最有效且为最重要的治疗手段，但是仍有大约20%的鼻咽癌患者治疗后出现局部复发。目前的研究发现碳酸酐酶Ⅸ（Carbonic anhydraseⅨ，CAⅨ）相关的信号通路与多种恶性肿瘤的放疗抗拒性相关，但是CAⅨ与鼻咽癌放疗抵抗的关系尚不明确。在这项研究中，我们设计了标靶CAⅨ基因的小干扰RNA(CAⅨ-siRNA)，利用脂质体转染试剂lipofectamine2000将CAⅨ-siRNA转染进鼻咽癌CNE-2细胞内沉默CAⅨ的表达，观察下调鼻咽癌CNE-2细胞中CAⅨ的表达水平对其放射敏感性的影响。 目的： 探讨在体外利用RNA干扰技术沉默碳酸酐酶Ⅸ的表达对鼻咽癌细胞CNE-2放射敏感性的影响。 方法： 1.设计3条特异性标靶CAⅨ基因的小干扰RNA（CAⅨsiRNA1,2,3）、1条阴性对照小干扰RNA（NC-siRNA）和1条6-羧基荧光素（FAM）标记的阴性对照小干扰RNA（FAM-siRNA）。 2.利用脂质体转染试剂lipofectamine2000将终浓度为（0，10，30，50，80和100nM）的FAM-siRNA转染进鼻咽癌CNE-2细胞，流式细胞仪检测不同浓度siRNA转染后细胞内发出的FAM荧光强度，并且在激光共聚焦显微镜下观察FAM-siRNA的细胞摄取水平，计算转染效率，以确定该实验的最佳转染终浓度。 3.利用脂质体转染试剂lipofectamine2000将3条标靶CAⅨ基因的小干扰RNA（CAⅨsiRNA1,2,3）转染进鼻咽癌细胞，并且借助荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和免疫印迹（Western boltting）的方法筛选出沉默效果最好的两条链。 4.将细胞分为空白对照组（Control）、转染试剂对照组（Mock）、阴性对照组（NC-siRNA）和CAⅨ沉默组（CAⅨ-siRNA），利用噻唑蓝法（MTT）检测各组细胞在相应处理后12、24、48和72h时的细胞存活率。 5.细胞按照不同的接种密度（200，400，600and5000个细胞/孔）接种至六孔板中，分成空白对照组（Control）、阴性对照组（NC-siRNA）和CAⅨ沉默组（CAⅨ-siRNA），分别接受0，2，4，6Gy单次X线照射，最后利用克隆形成实验得出各组细胞的存活分数（SF）。 6.将细胞分为空白对照组（Control）、阴性对照组（NC-siRNA）和CAⅨ沉默组（CAⅨ-siRNA），利用流式细胞仪分析各组不照射和接受6Gy X线照射后的凋亡细胞比例及细胞周期的分布情况。 结果： 1.FAM-siRNA能成功被lipofectamine2000转染进鼻咽癌细胞中，siRNA终浓度为100nM时转染效率最高（P＜0.01），但是此时细胞活性较其他组差，siRNA终浓度为50和80nM时转染效率无差异（P=0.490），因此我们选择了50nM为转染的最佳终浓度，其转染效率为80%±5%。 2.Real-time PCR和Western boltting检测发现3条siRNA链均能显著抑制鼻咽癌细胞中CAⅨmRNA和蛋白的表达，其中CAⅨ-siRNA1沉默效果最佳，CAⅨ-siRNA2次之，CAⅨ-siRNA3最差。 3.与对照组相比，CNE-2细胞经CAⅨ-siRNA1和CAⅨ-siRNA2转染后增殖能力均明显受抑制（P＜0.01），其中CAⅨ-siRNA1转染后72h细胞活性受抑制最为明显。 4.在各个剂量点经CAⅨ-siRNA1处理后细胞存活率（SF）明显低于其余两组。Control、NC-siRNA和CAⅨ-siRNA1组的SF2（2Gy时的细胞存活分数）分别为0.47、0.48和0.32，CAⅨ-siRNA1组放射增敏比（SER）为1.47。 5.不进行射线照射时，CAⅨ-siRNA1组细胞凋亡率略高于较其余两组，Control组、NC-siRNA组和CAⅨ-siRNA1组的细胞凋亡率分别为：6.13%±0.73%、6.98%±0.47%和10.81%±0.62%（P<0.01）；接受6Gy电子线的照射后，CAⅨ-siRNA1组细胞凋亡比例较其余两组升高明显，分别为：8.87%±0.38%、9.77%±0.46%和20.19%±0.47%（P<0.01）。 6.各组细胞在放疗前，各组细胞中的G0/G1期、S期和G2/M期周期分布比例无明显差别（P＞0.05）。而在放疗24h后各组细胞都出现不同程度的G2/M期阻滞，其中CAⅨ-siRNA1组G2/M期细胞的比例较Control组和NC-siRNA组明显增多（P＜0.05），而G0/G1期细胞则减少（P＜0.05），Control组和NC-siRNA组之间细胞周期分布无明显差异。 结论： 沉默CAⅨ的表达能明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞的增殖，促进放疗后的细胞凋亡，并且能加剧肿瘤细胞放疗后出现的G2/M期阻滞。因此可推断下调CAⅨ的表达能增强鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性，其中的机制可能是下调CAⅨ的表达后可增强放疗诱导的G2/M阻滞。这提示了CAⅨ可能是一个具有治疗前景的靶点，针对CAⅨ的靶向治疗应用于放疗抵抗的鼻咽癌可能使患者获益。