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本研究旨在获得猪硒蛋白IDⅡ和Sel S的基因序列,构建IDⅡ和Sel S189基因的基因工程原核表达菌,并在原核表达系统中得到表达,以此纯化的重组融合硒蛋白类似物为抗原免疫家兔,在国内首次得到了兔抗猪硒蛋白IDⅡ和Sel S多克隆抗体,此抗体可进一步快速鉴定融合蛋白内或组织中硒蛋白IDⅡ和Sel S,为以猪为模型进一步研究猪硒蛋白IDⅡ和Sel S的蛋白质结构和生理功能提供了重要的依据。本研究采用RT-PCR技术从猪肺组织中克隆了硒蛋白IDⅡ和SelS基因,通过分子生物学手段构建原核表达载体,经表达和纯化得到融合目的蛋白,并以此蛋白作为免疫原制备多克隆抗体,同时从蛋白质的角度进一步分析了猪硒蛋白IDⅡ和Sel S在不同猪组织中的表达分布情况。本实验主要研究结果如下：1.根据NCBI GenBank中相应序列设计特异性引物,从猪肺组织中提取总RNA,应用RT-PCR技术得到cDNA,以此为模板进行TA克隆得到Sel S基因,电泳结果分析显示,其条带约为567bp,与预期片段大小相符,测序结果分析表明,其核苷酸序列与张宁波从巴马小型猪克隆的实验结果基本相同,与Jorgensen,F.G测得的Sel S基因相应部分序列基本相同,证明已经成功克隆获得了Sel S基因；2.对IDⅡ基因进行了定点突变,通过基因定点突变技术将编码硒代半胱氨酸的编码子TGA突变成半胱氨酸的编码子TGT；3.将目的基因正向插入载体pET-30a(+)中,成功构建原核表达载体pET-30a(+)-IDⅡTGT和pET-30a(+)-Sel S189,转化入宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导后成功表达了IDⅡ突变体和Sel S肽段,经过SDS-PAGE电泳显示,其蛋白质分子量分别是29.7KD和26.7KD,与预期结果相符,表明IDⅡ突变体和Sel S肽段可通过原核表达系统成功表达；4.利用融合蛋白中带有的His标签经Ni-NTA-Agarose柱亲和层析纯化表达的IDII突变体和Sel S肽段,以此纯化蛋白作为免疫原免疫家兔,成功制备了兔抗猪硒蛋白IDⅡ Sel S多克隆抗体,并用间接ELISA法检测抗体亲和力,用western blot法鉴定抗体的特异性,结果证明抗体效果良好。5.利用ELISA法检测猪组织中硒蛋白的分布。结果表明,IDⅡ在下丘脑、垂体、骨骼肌、十二指肠和肝脏等组织中都有分布,其中下丘脑中含量最高,骨骼肌、十二指肠及垂体中含量次之；Sel S不仅在骨骼肌、肝脏、脂肪组织以及下丘脑等组织中有分布,还在十二指肠及甲状腺中有所分布,其中骨骼肌的含量最高,肝脏、十二指肠及甲状腺中含量次之,特别是在下丘脑中分布不明显。本研究成功得到ID Ⅱ和Sel S基因序列,并成功构建了原核表达载体pET-30a(+)-IDⅡTGT和pET-30a(+)-Sel S189,并在原核表达系统中成功表达,以纯化的目的蛋白为免疫原,成功制备了兔抗猪硒蛋白IDⅡ和Sel S多克隆抗体,同时研究了硒蛋白IDⅡ和Sel S在13种不同猪体组织中的表达分布情况,建立了一种快速有效的鉴定融合蛋白内或组织中硒蛋白ID Ⅱ和Sel S的有效方法。