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木聚糖是半纤维素的一种最主要的成分,是除了纤维素以外含量最高的可再生资源,以木聚糖为底物的木聚糖酶是一种非常重要的酶,在快速工业化的过程中有很大的发展应用潜力,因此得到了越来越广泛的研究。生活在极端环境中的极端环境微生物所产生的木聚糖酶具有很多普通微生物酶所不具有的优良特性,比如耐盐、耐高温及耐酸碱等特性。目前,人们对于高盐环境下产木聚糖酶的极端环境微生物研究较少。本实验室前期分离到了一株耐盐的菌株海微菌 LS-A18,具有产木聚糖酶的特性,本文以该株菌为研究对象进行了进一步的研究。 本研究从海微菌LS-A18菌株中克隆得到了分别来自GH11家族和GH10家族的两种木聚糖酶基因xyl353及xyl1294,并构建了原核表达体系。通过诱导原核表达体系表达的方法分离得到了这两种木聚糖酶蛋白,并测定了其酶学性质。 1、本研究将得到的两种木聚糖酶基因连接到表达质粒pET-28a(+)上,转入受体细胞大肠杆菌E.coli BL21(DE3)内,并诱导其在E.coli BL21(DE3)内成功表达。 2、本研究通过DNS测定还原糖的方法来检测诱导获得的木聚糖酶是否具有木聚糖酶活性。并且最终确定所获得的木聚糖酶具有木聚糖酶活性。 3、本研究测定了两种木聚糖酶的最佳反应温度、最佳反应pH、最适盐浓度,得出最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为pH7.0,最适盐浓度为0%NaCl。 4、本研究测定了两种木聚糖酶的酶学性质。分别测定了温度稳定性、pH稳定性、盐浓度稳定性、金属离子、表面活性剂和有机溶剂对其影响。两种酶均在温和条件下酶稳定性最佳,当环境恶化之后,酶的稳定性随之降低;Hg2+对两种酶的活性均有较大的抑制作用,Co2+在一定的浓度条件下对两种酶的活性有一定的促进作用;添加剂 SDS、TritonX-100、β-巯基乙醇、高浓度(10 mM)EDTA以及常见的有机溶剂对Xyl353及Xyl1294的酶活力有较大的抑制作用。