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茶多酚是茶叶中的主要活性成份,可以调节脂类代谢,预防和减轻肥胖、高脂血症、糖尿病和动脉粥样硬化(AS)等疾病。研究表明,茶多酚可调节肠道菌群,双歧杆菌作为肠道菌群主要成员之一,具有改善宿主高脂饮食诱发的糖尿病、肥胖和动脉粥样硬化等疾病的作用。茶多酚是否通过调节肠道双歧杆菌菌群结构进而影响宿主脂类代谢和AS等相关疾病尚未见报道。本研究通过开展茶多酚饮食对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠肠道双歧杆菌和AS影响的研究,探讨茶多酚饮食、肠道双歧杆菌和AS三者之间的关系。 本研究中apoE-/-小鼠分为5组:高(H)、中(M)、低(L)剂量茶多酚组饲以高脂高胆固醇饲料,并分别在饮水中添加1.6g/L、0.8g/L和0.4g/L的茶多酚;以高脂高胆固醇饲料饲喂并且饮水不添加茶多酚作为对照(CK):常规饲料组(CONV)则仅喂食常规饲料。每周记录小鼠的体重和饲料消耗量,利用DGGE和实时荧光定量PCR技术分析肠道双歧杆菌菌群结构变化,处理16周后检测血脂水平,并取腹主动脉制作切片,HE染色后观察分析AS病变情况。主要研究结果如下: 1.H、M和L剂量茶多酚饮食与CK组小鼠的体重和饲料消耗量均无显著差异(P>0.05)。处理16周后,H和M组小鼠血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量均显著低于CK组(P<0.05),L组与CK组差异不显著(P>0.05),说明茶多酚饮食可以降低小鼠血清TC和LDL-C水平,并且可能存在剂量依赖关系;各组小鼠之间血清甘油三酯(TG)无显著差异(P>0.05)。 2.处理16周后,H、M组小鼠腹主动脉AS斑块/管腔面积比(PA/LA)分别为0.06和0.10,极显著地低于CK组(0.69)(P<0.01),L组的PA/LA值为0.36,也显著低于CK组(P<0.05),病理观察结果也显示AS病变程度与PA/LA呈正相关关系。可见茶多酚饮食可减轻小鼠AS病变,并且茶多酚剂量越高,PA/LA越低,AS病变程度就越低,说明茶多酚调节AS病变水平呈现剂量依赖关系。 3.DGGE图谱中条带序列测序结果表明,各组小鼠肠道双歧杆菌优势种群主要为Bifidobacterium pseudolongum,CONV组小鼠在处理8周后开始出现青春双歧杆菌(B。adolescentis)和长双歧杆菌(B.longum),CK组和茶多酚处理组未见这两个差异条带。处理8周后,主成份分析(PCA)和多样性分析结果显示H、M、L组与CK组小鼠肠道双歧杆菌多样性均有显著差异(P<0.05),说明茶多酚饮食可影响小鼠肠道双歧杆菌菌群多样性。 4.实时定量PCR结果显示,处理8周后,H、M和L组小鼠肠道双歧杆菌数量极显著高于CK(P<0.01),分别高3.5、3.3和0.8个数量级,说明茶多酚饮食能促进小鼠肠道内双歧杆菌的增长,并且茶多酚剂量越高,肠道双歧杆菌数量越多。 5.在本研究中,茶多酚饮食可影响小鼠肠道双歧杆菌,抑制AS病变水平,并且均呈现一定的剂量依赖关系,而肠道双歧杆菌数量与AS病变水平呈现负相关关系。因此我们认为茶多酚可能通过影响肠道双歧杆菌从而抑制AS的发生。