神经肽Y对脂肪细胞增殖及分化的影响

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目的:1.观察3T3-L1前脂肪细胞、人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)正常培养及诱导分化过程中的形态变化,绘制其生长曲线。2.研究不同浓度NPY对3T3-L1细胞及hADSCs增殖及分化的影响,初步探讨NPY与白色脂肪组织形成的关系。方法:1.3T3-L1细胞及hADSCs的复苏、传代、培养、生长曲线的绘制及诱导分化;采用经典的激素鸡尾酒诱导法诱导3T3-L1细胞、hADSCs分化为成熟脂肪细胞,油红O染色观察脂滴情况。2.不同浓度NPY(10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、10-14M、10-15M)作用于3T3-L1细胞、hADSCs24h,采用MTT法检测NPY对脂肪细胞增殖的影响。3.不同浓度NPY(10-7M、10-9M、10-11M)诱导3T3-L1细胞、hADSCs分化,油红O染色观察NPY诱导分化过程中脂滴的形成及变化情况。4.采用western blot检测NPY诱导脂肪细胞分化过程中PPARγ、C/EBPα的蛋白表达水平。5.采用western blot检测NPY诱导脂肪细胞分化成熟后白色脂肪组织特异性标志Cidec、RIP140的蛋白表达水平。结果:1.3T3-L1细胞、hADSCs正常培养时为梭状细胞,经典的激素鸡尾酒诱导法能成功诱导3T3-L1细胞、hADSCs分化为成熟脂肪细胞,油红O染色可见脂滴呈橘红色。2.不同浓度NPY作用3T3-L1细胞、hADSCs24h后,与无血清培养基组(阴性对照组)比较,10-6M~10-15M NPY促进3T3-L1细胞增殖;10-11M~10-14M NPY促进hADSCs增殖,10-7M、10-9M、10-10M NPY抑制hADSCs曾殖。3.NPY诱导3T3-L1细胞、hADSCs分化过程中,油红O染色观察到10-7M、10-9M、10-11M NPY均诱导脂滴形成、脂质合成、脂肪细胞分化。4. Western blot结果显示10-7M、10-9M、10-11M NPY都能促进脂肪细胞分化早期转录因子PPARγ、 C/EBPα蛋白表达增加。5. Western blot结果还说明10-7M、10-9M、10-11MNPY都能促进脂肪细胞分化成熟后白色脂肪组织特异性标志Cidec(小鼠的称FSP-27)、RIP140蛋白表达上调。结论:1.10-6M~10-15M NPY促进3T3-L1细胞增殖;而10-11M~10-14M NPY促进hADSCs增殖,10-7M、10-9M、10-11M NPY抑制hADSCs增殖。2.10-7M、10-9M、10-11M NPY均促进3T3-L1细胞、hADSCs分化为成熟脂肪细胞,NPY可能与白色脂肪组织的形成有关。
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