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目的:目前在黑龙江省男男性接触者中,对艾滋病相关知识和危险行为掌握较少,对HIV分离株的流行情况和生物学特征尚不清楚,以及对预防HIV的实验室方法依据更是微乎其微。因此,本研究目的就是掌握黑龙江省男男性接触者中艾滋病相关知识和危险行为,了解HIV流行抹的亚型及基因序列特征,以及进行基础实验,为行为干预及开发针对本地区HIV流行毒株的药物及疫苗提供一定的依据。
方法:由经过专业培训的调查者对男男性接触者人群进行一对一的问卷调查,同时收集研究对象的血液样本。血液样本经过WB证实为阳性者,分离其白细胞,用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对HIV-1附属基因(nef)进行扩增,然后进行克隆测序,并应用BioEdit和MEGA软件进行序列及系统发生分析。序列经过分析后,用PCR方法扩增某一HIV基因组gag片段以及人抗体Fc片段,用直接拼接法将片段拼成融合基因,并对融合基因后进行双酶切,然后定向插入到质粒pDAIS中,获得重组表达质粒pDAIS-gag/Fc。用苏通培养基及Midde 7H10培养基培养卡介苗菌(减毒活牛型分枝杆菌),并用抗酸染色法对卡介苗菌染色,在100倍油镜下进行鉴别。
结果:在1353名被调查的男男性接触者中,HIV感染率为2.3%。来自佳木斯、收入2000-3000、通过互联网寻找性伴和有过检测史的男男性接触者有较高的知识评分。在过去六个月,48.7%男男性接触者与多个男性发过肛交性行为以及37.3%的男男性接触者每次都用安全套。系统进化树显示31名阳性者体内HIV病毒的nef区序列属于泰国B亚型、3名属于重组型BC和1名属于重组亚型AE。各隔离株nef区的组内基因距离为13.53%。与国际标准株(HBX2)进行比较时,可以发现某些nef序列的氨基酸变异,但是,大多数序列还是有较好的保守性。重组质粒pDAIS-gag/Fc经酶切及测序鉴定表明,插入片段为gag和Fc基因片段。显微镜下显示牛型结核杆菌呈红色,其他非抗酸性细菌及细胞浆质等呈蓝色。牛型结核杆菌呈现细长,略有弯曲的红色菌体,有的可表现出分枝特征,有的菌体表现有多数浓染颗粒。
结论:在男男性接触者中艾滋病病毒感染率已经升高,并且广泛存着艾滋病相关危险行为,必须及时采取措施加以控制,防止艾滋病在该人群中广泛传播;这个人群中阳性者的HIV-1病毒株可能有共同的起源,而且所讨论的氨基酸基序可能对nef功能区的未来研究提供了重要信息;构建的质粒pDAIS-gag/Fc为以后制各表达HIV gag和Fc抗原的卡介苗转染树突状细胞提供了物质保证,为进一步探讨HIV核酸疫苗及树突状细胞疫苗奠定了基础。