论文部分内容阅读
目的：巯基乙酸(thioglycolic acid，TGA)作为冷烫精的主要成分，在美容行业中有着广泛的应用。有报道称，TGA可损害小鼠、大鼠和人的雌性生殖功能。卵母细胞成熟过程是形成健康卵子和维系生殖功能的一个关键步骤，但有关TGA对卵母细胞成熟影响的研究很少。本研究旨在阐明TGA对非洲蟾蜍卵母细胞体外成熟中若干细胞学事件的影响，同时还探讨TGA对成熟过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和成熟促进因子（maturation promoting factor, MPF）信号的影响。
方法：在体外培养过程中，在孕酮刺激后每lh观察一次卵母细胞生发泡破坏（germinal vesicle breakdowN,GVBD）情况，并用三氯乙酸固定后切开确认。收集GVBD期和MⅠ/MⅡ转变期的卵细胞，提取蛋白，并进行Western blotting检测。收集8h时已发生GVBD的细胞进行固定、染色，在显微镜下观察细胞染色体形态，以评价细胞成熟状态。
结果：本研究结果表明，TGA可加快非洲蟾蜍卵母细胞GVBD的发生，但抑制细胞第一极体的排出和停滞于MⅡ期卵母细胞的形成，即抑制了卵母细胞的成熟，呈剂量依赖关系。在孕酮刺激后的GVBD期，TGA处理细胞中MAPK信号途径的两个重要蛋白ERK1和RSK的磷酸化水平明显较高，MPF蛋白激酶调节亚基—Cyclin B1蛋白的表达水平有升高，而磷酸化Cdc2蛋白的表达有下降。在孕酮刺激后的MⅠ/MⅡ转变期，TGA对ERK1和RSK蛋白的磷酸化水平没有明显影响，但是可抑制Cdc2蛋白的脱磷酸化作用和Cyclin B1蛋白表达水平。培养过程中，TGA对MAPK信号途径的生理激活剂Mos蛋白无明显影响。在用U0126阻断MAPK信号途径后，TGA仍然可以促进GVBD期中Cdc2蛋白的脱磷酸化作用和Cyclin Bl蛋白表达。
结论：TGA处理可促进非洲蟾蜍卵母细胞体外成熟过程中的GVBD发生，但抑制了细胞的成熟，同时MAPK和MPF相关蛋白也发生改变。鉴于成熟卵母 细胞的形成是维系正常生殖的一个关键步骤，本研究结果具有一定的公共卫生意义。