樱桃砧木Colt抗菌肽基因转化研究

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以樱桃砧木Colt(Prunsavium×Pruns pseudocerasus)茎尖为外植体,用携带有抗菌肽基因的根癌农杆菌进行基因转化研究。利用烟草高频再生体系检测工程菌的侵染力,并将pSMC 质粒由LBA4404 转移到A208SE、EHA105。用pSMC/A208SE转化樱桃砧木Colt,共获得9个转化克隆系,对部分转基因植株进行PCR检测及抑菌、诱发冠瘿瘤实验初步证明抗菌肽基因已整合到植物基因组中并得到了表达。本研究表明:在影响根癌农杆菌介导转化的众多因素中,农杆菌和外植体细胞良好的生长状态是保证转化成功的关键。用YEB-1(pH5.6)培养基活化农杆菌,培养至OD600为0.4时用于侵染,取苗龄为25d、1~3mm茎尖,在分化培养基中进行1d的预培养,可提高其对农杆菌的感受力。转化过程中,侵染5~7min,共培养3d,再延迟选择3~7d,温度24~26℃之间,为最佳转化条件,可使转化频率由2.21±0.4%升高到3.01±0.2%。
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