论文部分内容阅读
目的 分析比较椎板切除术后脊柱的不稳是否是影响硬膜外瘢痕形成的重要原因以及椎板切除术后钢丝固定与自体移植脂肪对硬脊膜外瘢痕形成的影响。方法:SD大鼠128只,随机分为16小组,每组8只,行L3全椎板切除,分别为棘突间钢丝固定与移植脂肪组(IF组),单纯钢丝固定组(I组),移植脂肪组(F组)及对照组(C组)。术后2、4、6、8周处死动物,分别大体观察。观察评分标准采用Rydell大体评分标准。瘢痕面积测定:取Masson 三色法染色切片每组8张,共128枚,用American image-proplus 计算机图象分析系统对病理切片中瘢痕面积进行测量。硬膜外侧瘢痕的测量范围:自硬膜后缘向后1/2个椎管前后径处划一水平线,测量该线前方的所有瘢痕面积,将每张切片的瘢痕面积相加求值后除以椎间盘的面积,即为该标本的瘢痕面积指数。成纤维细胞及炎性细胞的测定:HE染色组织切片取同一放大率的瘢痕组织图像(640х),直接输入计算机,在显示器上用鼠标器对成纤维细胞和炎性细胞进行计数。为了减少误差,每标本计数3个不同的视野,一个位于中央,两个位于边缘。且由一位不知实验过程及实验原理的病理医师计数。免疫组化方法:病理组织切片以CD34单克隆抗体作为第一抗体,按照免疫组织化学SP步骤进行,DAB显色,苏木素复染,每组用0.01mmol/l的PBS液替代CD34抗体作阴性对照(试剂购自于武汉博士德公司),应用免疫组化显示血管,对不同时期的血管生成情况及早期的炎性反映情况进行观察。生化定量胶原蛋白含量检查:应用许志勤[2]等的组织羟脯氨酸测定的改进方法,将大体观察时标本一侧切取2mm x 2mm大小的瘢痕组织脱水、脱脂、水解。使所有的氨基酸肽链全部断裂,成为游离氨基酸,取标本后加入羟脯氨酸显色剂,经紫外线分光光度计测定羟脯氨酸的含量。根据胶原纤维中羟脯氨酸的含量比例(13.4%)推<WP=5>算出胶原纤维的含量。结果:大体观察,于2周及4周时,I组粘连程度低于C组,且有统计学意义(p<0.05)。8周时,IF组粘连程度低于F组,且有统计学意义(p<0.05)。2~8周时,I组瘢痕面积小于C组(p<0.05)。6~8周时,IF组面积小于F组,且有统计学意义(p<0.05)。2W时,I组成纤维细胞数量少于C组(p<0.05)。2周时,IF组炎性细胞数量高于F组;4~6周时,IF组炎性细胞低于F组;4周时I组炎性细胞低于C组;以上均有统计学意义(p<0.05)。2~8W时,I组与C组的胶原蛋白含量比较时无统计学意义。4W时,I组的血管含量少于C组(p<0.05)。结论:脊柱的不稳可能是加重椎板切除术后硬膜外瘢痕形成及延缓瘢痕成熟的重要原因,移植脂肪及稳定脊柱在椎板切除术后早期有预防硬膜外瘢痕形成的作用。