【摘 要】
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目的：中国美利奴绵羊是我国新疆特有的兼肉用与毛用于一体的绵羊品种之一，它的屠宰与使用量也是非常大。然而，对美利奴绵羊安全和可重复的生产胚胎的技术研究不是很多，因此如何提
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目的：中国美利奴绵羊是我国新疆特有的兼肉用与毛用于一体的绵羊品种之一，它的屠宰与使用量也是非常大。然而，对美利奴绵羊安全和可重复的生产胚胎的技术研究不是很多，因此如何提高美利奴绵羊的胚胎生产率便是当下待解决的问题之一。目前多使用蛋白激酶抑制剂或离子霉素来人工激活卵母细胞，其缺点是不清楚它特异性的激活或抑制了某种酶的生物活性，或某种特定蛋白质的合成。这种方式对我们研究激活卵母细胞卵裂的机理，或是对卵母细胞激活后的发育因素都是我们无法不确定的。因此，需要一种全新的激活卵母细胞的生物制剂，它既不使用蛋白的合成抑制剂又不使用蛋白磷酸化抑制剂，仅通过单一增加胞质内Ca2+浓度这一决定性因素来激活卵母细胞。它的获得不仅能阐明美利奴绵羊卵母细胞激活的机制也能为将来生产优质的囊胚提供帮助。本实验为国内首次在绵羊上探究磷脂酶C zeta (PLCζ)真核表达载体是否可以作为一种新的卵母细胞激活物质。方法：(1)将扩增后的基因克隆至PMD-19的T载体上，构建了PLCζ克隆载体，然后使用EcoRΙ和BamHΙ双酶切后，将PLCζ基因与原核表达载体pCzn1以及pEGFP-N1真核表达载体连接；(2)将构建成功的原核表达载体-pCzn1-PLCζ转入E.coliArctic ExpressTM(DE3)表达菌中诱导表达；(3)将构建成功的pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体经脂质体LipofectamineTM2000介导转到293T细胞中表达并观察其分布情况;(4)用组织块法分离培养美利奴绵羊胎儿成纤维细胞，通过脂质体LipofectamineTM2000转染将pEGFP-N1-PLCζ转入到绵羊胎儿成纤维细胞中表达并观察其分布情况；(5)采集美利奴绵羊的卵巢，将成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-PLCζ通过显微注射的方法进行注核，观察卵母细胞的激活情况。结果：(1)构建了pEGFP-N1-PLCζ这一个具有绿色荧光的真核表达载体，并且成功与绿色荧光蛋白融合表达；(2)构建了PLCζ基因的原核表达载体(pCzn1-PLCζ)，并获得融合蛋白；(3)将重组质粒pEGFP-N1-PLCζ注入卵母细胞后，可以激活绵羊卵母细胞的孤雌发育；结论:(1)了解了pEGFP-N1-PLCζ在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达及其分布情况；(2) PLCζ的重组质粒注入M期卵母细胞可促进卵母细胞的孤雌发育；
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