论文部分内容阅读
β-兴奋剂(β-agonist)是一类化学结构和生理功能类似于去肾上腺素和肾上腺素的苯乙胺类药物。β-兴奋剂在临床上常用于防治人、畜的支气管痉挛和哮喘等病症。大剂量的β-兴奋剂能影响营养物质在动物体内的重新分配,显著提高瘦肉率。因此,β-兴奋剂曾被作为饲料添加剂广泛用于畜牧生产中。β-兴奋剂在动物内脏蓄积严重,能通过食物链进入人体,使人出现心悸、头晕、心律失常等症状,严重时甚至会导致死亡。因此,β-兴奋剂的检测一直是食品安全的重点问题。目前,针对β-兴奋剂多残留检测主要是GC/MS、HPLC-MS等仪器方法和ELISA免疫分析方法,还未有β-兴奋剂多残留免疫层析技术的研究报道。本文以β-兴奋剂为研究对象,结合纳米材料技术,应用于免疫层析技术中,建立了β-兴奋剂多残留免疫层析试纸条定量检测方法,并对建立的检测方法的性能指标进行评价。主要的研究内容及结果如下:(1)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并与β-兴奋剂单克隆抗体进行偶联,形成金标抗体复合物,建立了β-兴奋剂多残留的GICA检测技术,本方法对克伦特罗(CL)检测线性范围(IC20-IC80)为0.26~5.70μg/L,IC50为1.23μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.11μg/L,单个样品检测时间只需8 min;沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗对克伦特罗都有交叉率,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条检测回收率在83.6%~102.19%之间,对阴性猪肉的加标回收实验中,试纸条检测回收率在64.27%~87.98%之间,且批内批间的相对标准偏差均在15%以内,与ELISA、HPLC-MS法的对比试验表明,该试纸条能应用于实际样品中β-兴奋剂多残留的定量检测。(2)以CdTe/ZnS量子点为标记材料,采用EDC/NHS法将羧基化量子点与β-兴奋剂单克隆抗体进行偶联,形成QDs-mAbs荧光复合物。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,建立了β-兴奋剂多残留的FICA检测技术。结果表明,本方法对克伦特罗(CL)检测线性范围(IC20-IC80)为0.14~2.28μg/L,IC50为0.56μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.06μg/L,单个样品检测时间只需10 min;沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗对克伦特罗都有交叉率,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条检测回收率在80.4%~103.7%之间;对阴性猪肉的加标回收实验中,试纸条检测回收率在68.67%~82.62%之间,且批内批间的相对标准偏差均在15%以内,与ELISA、HPLC-MS法的对比试验表明,该试纸条能应用于实际样品中β-兴奋剂多残留的定量检测。