【摘 要】
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黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是植物病毒研究中的模式病毒,其寄主范围广,对植物危害严重。已知多数CMV株系包含卫星RNA,CMV卫星RNA能够修饰CMV感染寄主植物后的
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黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是植物病毒研究中的模式病毒,其寄主范围广,对植物危害严重。已知多数CMV株系包含卫星RNA,CMV卫星RNA能够修饰CMV感染寄主植物后的症状。目前对于CMV卫星RNA与辅助病毒CMV互作机制的研究还很不深入,由于CMV天然株系多带有卫星RNA,因此为了更好地研究卫星RNA修饰CMV病症的机理,构建不含有卫星RNA的CMV侵染性cDNA克隆就显得尤为重要。
本研究利用RT-PCR技术对CMV山东株系(SD-CMV)进行分段克隆cDNA和测序,最终连接到含有35S强启动子的植物双元表达载体上。随后利用体外转录、农杆菌介导的注射瞬时表达以及Northern blotting杂交等方法,对其侵染性进行分析和鉴定。同时,我们还将SD-CMV卫星RNA5端可能的复制起始区25及50个核苷酸序列分别与绿色荧光蛋白(GFP)融合(即25-GFP与50-GFP),检测CMV对卫星RNA积累水平变化的影响。
结果表明,我们构建的CMV侵染性克隆注射本名烟(N.B)后植物注射叶及系统叶均出现较明显的CMV侵染症状,具体表现为叶片皱缩黄化,说明具有一定的侵染性,体外转录试验的结果也与之相似,但与利用野生毒源侵染的植物相比,症状较弱,植物体内积累的CMV RNA的水平也较低。这可能与CMV RNA1对农杆菌的毒性造成的碱基突变有关。
另外,在CMV毒源侵染条件下,与25-GFP和GFP相比,50-GFP积累了更高水平的RNA,而在未侵染条件下三种植物的GFP RNA积累水平相似,说明CMV侵染确能促进卫星RNA的积累。
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