OVOL2调控结直肠癌转移和侵袭的机制研究

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OVOL2是进化上相当保守的一种转录因子,它与胚胎发育之间的关系已经被很多研究所报道,但是OVOL2与肿瘤的发生发展关系还知之甚少。本文主要从OVOL2是如何调控结直肠癌的转移与侵袭方面做了详细的研究。  首先我们从结直肠癌病人样本的组织芯片中发现肿瘤中OVOL2含量低的病人预后生存期更短。然后我们通过体外细胞增殖实验、裸鼠皮下成瘤实验、小鼠免疫组化实验、HE染色实验证实了OVOL2不能够抑制结直肠癌的增殖。于是我们猜测OVOL2可能是通过抑制结直肠癌转移和侵袭过程,延长患者的寿命。于是我们通过细胞划痕实验、Transwell实验、裸鼠尾静脉肿瘤细胞注射实验、裸鼠原位肿瘤细胞注射实验、HE染色实验、免疫荧光实验证实了OVOL2能够抑制结直肠癌的转移。  接下来我们通过Oncomine数据库筛查与肿瘤转移有关与OVOL2共表达的基因,通过免疫组化实验、细胞免疫荧光实验、蛋白印迹实验我们证实了OVOL2能够抑制结直肠癌细胞的EMT进程。我们通过qPCR array找到了与OVOL2相关性较高的关键蛋白SLUG。并通过免疫印迹实验、荧光实时定量PCR实验、细胞划痕实验、Transwell实验、荧光素酶报告质粒活性检测实验证实了OVOL2是通过抑制SLUG来抑制结直肠癌的EMT进程。我们通过点突变SLUG启动子上的OVOL2结合位点发现OVOL2并不是直接负调控SLUG的表达,而是通过抑制Wnt信号通路的转录活性负调控SLUG的表达。  我们通过荧光素酶报告基因活性检测实验、免疫染色质共沉淀实验、免疫组化实验发现OVOL2是Wnt信号通路的直接靶基因。由此我们提出OVOL2与Wnt信号通路之间存在的负反馈作用在结直肠癌的转移与侵袭中具有重要的调控作用。
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