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广州管圆线虫（Angiostrongylus can tonensis）是一种人畜共患自然疫源性寄生虫，能引起人的嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎，也被称为广州管圆线虫病。其中间宿主是软体动物，例如福寿螺、玛瑙螺等，并以啮齿类动物等作为其终宿主。人类是广州管圆线虫的偶然宿主，因误食寄生有广州管圆线虫的第三期幼虫(L3)的福寿螺等而引起广州管圆线虫病。 寄生虫的天冬氨酸蛋白酶抑制剂(aspartyl protease inhibitor，API)在寄生虫的寄生生活中起着重要的作用，包括寄生虫的营养摄取，组织入侵，免疫逃避，生长发育等等。本论文以广州管圆线虫为研究对象，以API基因作为研究的目的基因，对目的基因进行克隆、表达和各期虫体定位定量分析。通过序列比对的方法，在NCBI上找到广州管圆线虫API基因的部分序列，再用RACE扩增技术扩增5和3端部分，获得基因全长序列，利用NCBI，signalP等多种在线分析软件预测其API蛋白的结构及进行功能分析。用primer5设计特异性引物，以线虫mRNA反转录得到的cDNA为模板进行体外扩增，并将得到序列构建表达载体，之后分别转入大肠杆菌BL21表达菌中大量诱导培养，获得重组蛋白并纯化，然后将这些纯化后重组蛋白免疫小鼠，制备多克隆抗体。将得到的抗体作为一抗，Cy3标记的羊抗小鼠IgG作为二抗对广州管圆线虫做各期虫体的免疫组化研究。为测定API在各期虫体中的差异表达，我们进行了API在广州管圆线虫第一期幼虫(L1)、L3、第五期虫(L5)和雄性成虫、雌性成虫中实时荧光定量PCR。获得API基因全长克隆后，已将序列上传至GenBank，AcAPI基因序列号为KX138274，广州管圆线虫API基因全长887 bp包含678 bp的编码阅读框(99-776 bp)，包含98 bp的5UTR和113 bp的3UTR，编码226个氨基酸，有信号肽序列，无跨膜结构。各期广州管圆线虫中对API的免疫组化结果显示，API在L1中肠道表达量较高，在神经环和角质层上也有表达，其他区域表达量较低;L3特异表达在侧翼上，角质层及体壁肌肉层也有表达;雌雄虫主要表达在生殖腺中，我们推测API与线虫成虫的生殖作用有关，并且线虫通过分泌API到体外，抑制宿主体内相关酶的活性来适应宿主体内生活。 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)结果显示广州管圆线虫API在L1、L3、L5、雌雄虫中均有表达，在L3期的表达量最低，雌虫的表达量最高。我们推测API的表达量可能与线虫的生殖作用有关，并且可能和该期虫体所在的宿主有关。