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笔者所在实验室在国内外首次利用多粘类芽孢杆菌HY96-2创制出具有自主知识产权的微生物农药-0.1亿cfu/g多粘类芽孢杆菌细粒剂并实现产业化,多年的田间药效试验表明它可有效地防治西瓜枯萎病等真菌病害。本文旨在分离纯化HY96-2发酵液中Fusaricidins类抗真菌活性物质,鉴定其结构,以期获得可有效防治植物真菌病害的Fusaricidins活性化合物,为开发以其代谢产物Fusaricidins为有效成分的生物农药的创制提供物质基础。 本文采用酸化加热、正丁醇萃取及乙酸乙酯沉淀法,从HY96-2发酵液中制备出Fusaricidins粗提物(Fusaricidin A、B含量为10％);进一步采用硅胶柱层析、SephadexLH-20柱层析、HPLC等分离技术从粗提物中分离得到4A、4B、6A、6B、7B和7C六个活性组分;通过1H NMR、13C NMR、ESI-MS和ESI-MS/MS等波谱方法确认了此六个活性组分均为Fusaricidins家族物质;其中6B为Fusarieidin A,4B为Fusaricidin C、D混合物,6A为Fusaricidin A、B混合物,7B为LI-F05a、LI-F05b混合物,7C为LI-F07a、LI-F07b混合物,4A有可能是一对新的Fusaricidins家族成员。 双层琼脂打孔法抑菌活性测定试验结果表明,6B对尖孢镰刀菌(西瓜专化型)、黄瓜炭疽病菌等15种植物病原真菌均具有较好的抑制效果。进一步抑菌实验结果表明,在对20株测试菌(包括16株真菌和4株细菌)的抑菌实验中,6B对其中的15株真菌和2株细菌有抑制作用,其中对白术白绢病菌、长柄链格孢菌、黑白轮枝病菌、黄瓜黑斑病菌、立枯丝核菌、烟筝赤星链格孢菌、玉米弯孢菌、茄交链格孢菌的MIC均为25μg/mL,对尖孢镰刀菌香焦号化型和尖孢镰刀菌西瓜号化型的MIC均为12.5μg/mL;对枯草芽孢杆菌和胡萝卜软腐欧文氏杆菌的MIC均为6.25μg/mL;6B对白术白绢病菌、长柄链格孢菌、黑白轮枝病菌、黄瓜黑斑病菌、立枯丝核菌、烟草赤星链格孢菌、玉米弯孢菌、茄交链格孢菌、胡萝卜软腐欧文氏杆菌的抑菌活性均为首次报道。初步的盆栽实验结果表明,当Fusaricidins粗提物浓度达2000μg/mL,对黄瓜灰霉病的防效达到98.3％。 综上所述,HY96-2产生的Fusaricidins类物质对多种植物病原菌具有较好的抑制效果,具有生物农药开发的潜力。