论文部分内容阅读
目的：寻找上皮性卵巢癌（EOC）癌相关成纤维细胞(CAFs) 和正常成纤维细胞（NFs）中差异表达的mRNA并进行分析;探讨癌相关成纤维细胞中差异基因在调控卵巢癌细胞恶性行为的分子机制。 方法：1.采用Trizol法提取3例NFs及3例CAFs的总RNA;通过芯片杂交;洗染;扫描;对芯片原始数据进行归一化处理;利用倍数差异筛选出相关差异表达基因;2.应用DAVID系统进行基因Gene Ontology(GO)富集及信号通路联合分析;推定相关差异基因生物学功能;并对部分差异表达基因进行荧光定量 PCR 验证;3.荧光定量PCR检测差异基因mRNA在不同类型EOC癌细胞中的表达;4.卵巢癌细胞株与CAFs共培养后;PCR验证差异基因的改变;5.选择共培养后表达改变最为明显的基因进行功能验证。 结果：1.通过对芯片结果进行分析;发现差异基因共1636个;和NFs相比;CAFs中上调的基因有1001个;下调的有635个。qRT-PCR对部分差异基因的验证结果与芯片结果相符;2.生物信息学分析提示上述筛选出差异性表达的mRNA与癌相关通路、肌动蛋白细胞骨架重塑通路等有关;3.荧光定量PCR显示差异基因在卵巢癌细胞株的表达均高于正常卵巢组织;4.将肿瘤细胞与CAFs共培养后;观察目的基因均不同程度地升高;其中HIF1α的升高程度尤为明显;故选择做为进一步验证的目标基因;5.免疫组织化学显示卵巢癌组织中HIF1α无论在实质还是间质其表达均高于正常卵巢组织;6.肿瘤细胞和CAFs共培养后;其迁移能力增高;但可以被HIF1α抑制剂2-Methoxyestradiol (2-MeOE2)所抑制;7.与 iMEFs-HIF1α共培养的肿瘤细胞迁移能力明显强于与iMEFs-NC共培养的肿瘤细胞。 结论：卵巢肿瘤和正常卵巢微环境中存在差异性表达的基因;差异基因涉及癌相关通路、肌动蛋白细胞骨架重塑通路;可能参与成纤维细胞调控癌细胞的生物学行为。HIF1α作为明显差异性表达地基因可能参与CAFs调控上皮性卵巢癌癌细胞的转移。