论文部分内容阅读
目的： 光老化是指由于特定的环境因素，如紫外线、风吹、吸烟等因素，所导致的皮肤衰老的一系列的临床表现，其主要的组织学特征是包括MMP、TGF-β、AP-1等参与的基质构成的改变。点阵激光作为一种新兴的治疗方式，因其既可将剥脱性激光的作用发挥到最大，又可将副作用降到最低，故临床上已越来越多的应用该手段治疗皮肤光老化。本次实验通过对受试者点阵激光术后治疗区域的病理取材进行免疫组织化学染色及Real-time RT-PCR等方式，观察不同能量密度超脉冲CO2点阵激光治疗光老化的疗效、不同能量密度超脉冲CO2点阵激光治疗光老化后TGF-β1及其mRNA的表达变化以及相同能量密度不同时间点超脉冲CO2点阵激光治疗光老化后TGF-β1及其mRNA的表达变化。 方法： 参照入选标与排除标准招募20名40-65岁（48.8±9.8）前臂光老化志愿者。 受试者清洗前臂后，在休息室内休息30分钟，协助医生建立个人档案并签署知情同意书。 将志愿者双侧前臂伸侧平均划分为12个区域（2cm×5cm，左尺侧上、中、下，左桡侧上、中、下，右尺侧上、中、下，右桡侧上、中、下），于治疗半小时前在治疗区域上外涂抹复方利多卡因软膏，半小时后在受试者的双侧前臂进行不同能量密度组合的DeepFX治疗，其中保留1个区域不做任何治疗（对照侧）。随机对每一个志愿者的一个治疗区域分别在术前、术后5h、7d、1m、3m进行病理取材。 将取材的组织块分成两份，其中一份用4％甲醛溶液固定后制成6μm石蜡切片应用免疫组织化学染色方法观察TGF-β的表达变化，另一份以OCT包埋液包埋后冻存于深低温冰箱应用实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β mRNA的表达。 结果： 当应用相同能量密度在不同时间点上观察TGF-β1的表达变化时，免疫组化结果显示，在不同的治疗区域内治疗后7天、1个月甚至3个月的表达较术前显著增高，PD值和OD值均明显增高，且于7天和1个月时达峰值，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。 当激光能量固定时，免疫组织化学染色及Real-time RT-PCR结果显示为，随着点阵密度的增加TGF-β1的表达及其mRNA的表达也逐渐增加，PD值和OD值显著增加且均具有统计学意义(P＜0.05)。而当点阵密度固定激光能量增加时，免疫组织化学染色可看到穿透深度在逐渐增加却并未看到TGF-β1的表达也随之增加，而是在个别能量时有强表达;另一方面Real-time RT-PCR结果显示在个别治疗区域7天和1个月mRNA的表达较其他时间有所增加，并未看到规律变化，其表达均不具有统计学意义(p＞0.05)。 结论： 通过应用免疫组织化学染色及实时荧光定量RT-PCR检测等方法观察了点阵激光术后皮肤中TGF-β1的表达显著增加，且其变化随着时间的增加及点阵密度的增加治疗效果也有显著上升，差异均具有统计学意义，说明点阵激光为治疗皮肤光老化的行之有效且安全的方法。