论文部分内容阅读
目的:巨噬细胞在肾结石形成中的作用仍不十分清楚。在这项研究中,我们研究了巨噬细胞极化在吡格列酮抑制肾脏结晶形成和炎性损伤作用中的相关机制。材料和方法:雄性C57小鼠被分为对照组,3天100mg/kg乙醛酸组,6天100mg/kg乙醛酸组,6天100mg/kg乙醛酸加5mg/kg吡格列酮组,6天100mg/kg乙醛酸加10mg/kg吡格列酮组,6天100mg/kg乙醛酸加15mg/kg吡格列酮组。分别在第4天或第7天收集肾脏标本。在体外实验中使用小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)。我们利用Pizzolato染色和偏振光光学显微镜检测晶体的形成。PPARγ、巨噬细胞相关基因、炎症相关基因的表达及巨噬细胞的数量分别采用Western blot、q PCR、免疫组化和免疫荧光等方法来检测。我们采用TUNEL法检测细胞凋亡,采用PAS染色评价肾小管损伤。采用免疫共沉淀法来确定蛋白质之间的相互作用。我们使用Ch IP方法和q PCR确定PPARγ是否直接与pre-mi R-23的启动子结合。我们使用荧光素酶报告基因检测法来确定mi R-23和下游分子之间的相互作用。结果:实验过程中,乙醛酸组小鼠肾脏内结晶形成、炎症、肾小管损伤和细胞凋亡均显著高于对照组,乙醛酸加吡格列酮组则较乙醛酸组明显减少。同时,乙醛酸加吡格列酮组中肾脏巨噬细胞浸润和M1型巨噬细胞较乙醛酸组显著减少。在体外实验中,吡格列酮将COM诱导的M1型为主的巨噬细胞转变为具有抗炎、肾小管细胞保护作用的M2型为主的巨噬细胞。在BMDM中,吡格列酮可直接增加mi R-23的表达。此外,我们的结果显示PPARγ可直接结合pre-mi R-23的启动子的PPARγ调节元件(PPRE)以促进mi R-23的表达。并且,我们将Irf1和Pknox1鉴定为mi R-23的下游靶基因。mi R-23在M1/M2巨噬细胞极化中起重要作用。结论:本研究提供证据表明,吡格列酮通过PPARγ-mi R-23-Irf1/Pknox1轴抑制M1型巨噬细胞极化而促进M2巨噬细胞极化来降低肾草酸钙晶体形成和炎症损伤。吡格列酮可能是一种潜在的用于尿石症的防治药物。