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目的:苦木注射液是《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》第20册收载的品种（WS3-B-3887-98）,为苦木干燥枝或茎经加工提取制得的单方中药注射液。由于苦木注射液生产工艺复杂,因此其化学成分与苦木药材有明显差异。目前尚未有文献对苦木注射液的化学成分进行报道,且部颁标准无指标性成分的定性鉴别和定量控制,因此苦木注射液的药效物质基础是一个亟待解决的问题。基于此,本文对苦木注射液的化学成分进行研究,结合单体化合物体外抗炎活性,明确苦木注射液药效物质基础,并在此基础上完善苦木注射液的质量评价标准。方法:1.综合运用硅胶柱层析、ODS柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、制备液相等色谱方法对苦木提纯浸膏进行分离纯化;采用核磁、质谱、红外等波谱技术以及结合其理化性质对得到的化合物进行结构鉴定。2.通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型对单体化合物进行NO抑制率抗炎活性筛选,明确苦木注射液的药效物质基础。并基于细胞代谢组学技术,考察具有抗炎活性化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞损伤前后细胞代谢产物的影响,寻找潜在的生物标志物及代谢通路。3.通过UPLC-Q-TOF-MS/MS对苦木药材-中间体-苦木注射液的化学成分进行表征,结合苦木注射液的生产工艺研究苦木药材-中间体-苦木注射液之间化学成分变化规律。4.在上述工作的基础上,结合部颁标准收录苦木注射液质量标准,优化苦木注射液薄层色谱鉴别方法,建立苦木药材-中间体-苦木注射液HPLC指纹图谱和指标成分含量测定方法,起草苦木注射液质量标准修订草案。结果:1.苦木注射液化学成分研究:利用HR-ESI-MS、IR、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、DEPT、1H-1H-COSY、ROESY结合理化性质确定了从苦木注射液浸膏中分离得到的43个单体化合物,4-methylharman（1）,N-methyl-β-carbolinium（2）,1-丙酸基-β-咔巴啉（3）,1-甲酸-β-咔巴啉（4）,1-羟基-β-咔巴啉（5）,1-甲氧甲酰-β-咔巴啉（6）,1,6-二羟基-β-咔巴啉（7）,β-carboline glucopyranoside（8）,1,2,3,4-四氢-1,3,4-三氧代-β-咔巴啉（9）,3-甲基-铁屎米-5,6-二酮（10）,4-甲氧基-5-羟基-铁屎米酮（11）,picraquanine D（12）,picraquanine E（13）,picrasin B（14）,nigakilactone N（15）,2,5-二羟基苯甲酸（16）,3,4-二羟基苯甲酸（17）,香草酸（18）,丁香酸（19）,（2S）-6-methoxyl-7-hydroxytropic acid（20）,picraquanine A（21）,glycerol-2-（3-methoxy-4-hydroxybenzoicacid）ether（22）,picraquanine B（23）,picraquanine C（24）,picraquanine F（25）,4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酰胺（26）,3-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）propane-1,2-diol（27）,pedatisectine F（28）,2-methyl-6-（2,3,4-trihydroxybutyl）pyrazine（29）,（E）-4-（6-methylpyrazin-2-yl）but-3-ene-1,2-diol（30）,（2S）-1-[2-（furan-2-yl）-2-oxoethyl]-5-oxopyrrolidine-2-carboxylic acid（31）,烟酸（32）,（E）-3-[5-（hydroxymethyl）furan-2-yl]methylene-4-oxo-pentanoic acid（33）,5-羟甲基-2-糠酸（34）,糠酸（35）,polybotrin（36）,glansreginic acid（37）,二氢红花菜豆酸（38）,（2E,4E,1’S,2’R,4’S,6’R）-dihydrophaseic acid（39）,2-（3’-hydroxy-5-methoxyphenyl）-3-hydroxylmethyl-7-methoxy-2,3-dihydrobenzofuran-5-carboxylicacid（40）,（+）-异落叶松脂酚（41）,5-羟基-3-甲基戊-2-烯酸（42）,己二烯二酸（43）,其中包括19个生物碱（4个新化合物）,4个苦味素（2个新化合物）,9个苯酚类化合物,3个呋喃类化合物,8个其他类化合物。通过对苦木注射液的化学成分研究,为后续药理活性和LC-MS苦木注射液化学成分表征的开展提供物质基础。2.苦木注射液化合物抗炎活性研究:1-甲酸-β-咔巴啉,1-羟基-β-咔巴啉,1-甲氧甲酰基-β-咔巴啉和1-6-二羟基-β-咔巴啉具有潜在的抗炎活性,表明β-咔巴啉生物碱是苦木注射液主要的抗炎活性成分,这为其质量标志物的发现和质量标准指定提供了理论依据。进一步采用细胞代谢组学策略,对苦木注射液抗炎活性化合物β-咔巴啉生物碱干预后的细胞代谢差异进行比较与相关数据库分析筛选出了15个生物标志物,主要涉及甘油磷脂代谢、醚脂类代谢、谷胱甘肽代谢,为苦木注射液抗炎活性研究提供一定的参考。3.苦木药材-中间体-苦木注射液UPLC-Q-TOF-MS/MS化学成分表征研究:本研究通过UPLC-Q-TOF-MS/MS建立了苦木药材-中间体-苦木注射液的定性分析方法,苦木药材主要含有β-咔巴啉类、铁屎米酮类和二聚体类生物碱,中间体和苦木注射液主要含有β-咔巴啉类和铁屎米酮类生物碱。结合苦木注射液的生产工艺,探讨苦木药材-中间体-苦木注射液化学成分的变化规律,苦木药材到中间体中二聚体类生物碱因极性小水溶性差被去除,β-咔巴啉类和铁屎米酮类生物碱因水溶性较好,在中间体中被保留。中间体到苦木注射液中主要色谱峰的化学成分无明显差异,主要是苦木注射液中铁屎米酮类生物碱含量明显减少,β-咔巴啉类生物碱成为苦木注射液中含量最高的生物碱。本研究为后续苦木注射液的质量控制提供物质基础的理论依据。4.苦木注射液质量标准提升研究:以1-丙酸基-β-咔巴啉为指标成分、自制对照药材（苦木茎）和苦木对照药材建立苦木注射液薄层色谱鉴别方法。建立苦木药材-中间体-苦木注射液HPLC指纹图谱,发现除中间体苦木浸膏外,不同批次苦木药材-中间体提纯浸膏-苦木注射液差异较为明显,主要共有峰是1-丙酸基-β-咔巴啉,1-甲酸-β-咔巴啉,因此进一步建立了苦木药材-中间体-苦木注射液中1-丙酸基-β-咔巴啉和1-甲酸-β-咔巴啉HPLC含量测定方法以全过程控制苦木注射液的产品质量。起草苦木注射液质量标准修订草案。结论:本研究确定了苦木注射液的药效物质基础为β-咔巴啉类生物碱,完善该制剂的质量评价体系,对于保证苦木注射液质量稳定可控、临床用药安全有效具有重大意义。