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目的:初步探索肿瘤抑素(Tumstatin)中第185-203位氨基酸片段(19肽)对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;并探讨其在原位裸鼠移植瘤模型中的抑瘤作用,为肿瘤抑素将来应用于临床肿瘤治疗中提供实验依据和理论基础。
方法:应用甲基四噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤抑素19肽对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用;收集处于对数生长期的乳腺癌细胞,制成单细胞悬液,接种于裸鼠第二对乳腺垫下,构建人乳腺癌裸鼠原位种植瘤模型,并饲养于无特殊病原体(Specefic Pathogen Free,SPF)级条件下。待模型建成后,将裸鼠半随机分成四组:肿瘤抑素19肽治疗组,环磷酰胺(CTX)治疗组,肿瘤抑素19肽和CTX联合治疗组及空白对照组;对各组分别应用肿瘤抑素19肽、环磷酰胺、肿瘤抑素19肽和环磷酰胺、溶剂进行隔日腹腔给药方法治疗,治疗过程中详细记录各组动物移植瘤的生长情况,饮食及其他一般情况,并对肿瘤的转移侵袭情况进行大体的对比分析研究。
结果:1.MTT实验显示:肿瘤抑素19肽对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显抑制其生长的作用,随着肿瘤抑素19肽浓度的逐渐增加,乳腺癌MDA-MB-231细胞存活率逐渐下降,表现为明显的剂量依赖性。药物的半数抑制浓度(IC50)为46.3±4.67mg/L。
2.用药期间,与环磷酰胺治疗组相比,肿瘤抑素19肽组和联合用药组的毒副作用明显较小,其饮食、活跃程度等一般情况都较好;肿瘤抑素19肽组和联合用药组荷瘤裸鼠带瘤体重下降较少,差异有统计学意义,P值分别为0.01和0.032,但联合用药组对肝组织的损伤比较严重。
3.与空白对照组相比,治疗组瘤体体积都较小,其中19肽组和环磷酰胺治疗组P值均为0.026,差异均有统计学意义;联合治疗组移植瘤体积最小,差异具有高度统计学意义(P<0.001)。
4.各治疗组的瘤重与空白对照组相比,肿瘤抑素19肽治疗组和环磷酰胺治疗组P值分别为0.043和0.041,差异均有统计学意义;而联合用药组差异具有明显统计学意义(P=0.001)。
5.各组裸鼠远处转移方面的比较,肿瘤抑素19肽治疗组六只裸鼠中有三例出现远处肺脏转移;环磷酰胺治疗组五只裸鼠中,有三只裸鼠出现肺脏转移;空白对照组中,两只裸鼠有一只出现肝转移;联合用药组六只裸鼠中,未见有远处转移灶的出现。
结论:肿瘤抑素19肽对体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞具有抑制其生长的作用;肿瘤抑素19肽具有抑制乳腺癌肿瘤细胞生长,并促进其凋亡的作用;与CTX相比,肿瘤抑素19肽作用较温柔,毒副反应较小;肿瘤抑素19肽可以减轻环磷酰胺治疗时的毒副反应;肿瘤抑素与环磷酰胺联合后可明显抑制肿瘤肿瘤细胞的远处转移,其与环磷酰胺联合后,对移植瘤的抑制作用得到了增强。