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本研究主要包括两部分内容:一、小麦蛋白的酶解及酶解物成分的测定;二、日粮添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠的影响研究。第一部分:小麦蛋白的酶解及酶解物的测定小麦蛋白的酶解:本试验选用粗蛋白质为77 %的小麦蛋白粉,添加Protamex复合蛋白酶,在底物浓度[S]为4.0 %(w/w),酶与底物比E/S为5 %(w/w),40℃,pH 6.5的条件下,反应2 h后,沸水浴15 min终止水解。小麦蛋白酶解物的成分分析:采用凝胶排阻色谱法测定酶解物中肽相对分子量分布;采用反相高效液相色谱进行梯度洗脱,外标法定量测定水解物中的十七种基本氨基酸;同时采用双氟乙酸基碘苯(BTI)保护肽中非N端谷氨酰胺,使其在随后的酸水解过程中不会转化成谷氨酸,间接测定肽中有效谷氨酰胺含量。测定结果表明:酶解物的水解度为15.62 %。酶解物中含有76.27 %相对分子量小于1400 Da的小肽,其中300-700 Da的小肽(大约为2-5肽)占60.68 %。酶解物中游离在水中的总氨基酸量为31.82 mg/mL,谷氨酸含量为12.59 mg/mL,谷氨酸占总氨基酸的39.57 %;肽中有效谷氨酰胺含量为2.54 mg/mL,占总氨基酸的7.99 %。第二部分:添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠生长性能、肠道功能、免疫功能、小肠抗氧化能力的影响采用单因子试验设计,选择72只25-28日龄健康雌性昆明小鼠,随机分为4个处理,每个处理设3个重复,每重复(笼)6只。处理Ⅰ为对照组,在基础日粮上添加1.0 %小麦蛋白;处理Ⅱ、处理Ⅲ、处理Ⅳ为试验组,在基础日粮上分别添加0.2 %、1.0 %、1.8 %的小麦蛋白的酶解物,试验在平均温度33℃,平均相对湿度77.5 %,平均温湿指数(THI)为87.27的热应激条件下饲养28 d。在试验的第14 d和28 d,各处理每重复随机选取3只,进行相关指标的测定,研究日粮中添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠生长性能、免疫功能、肠道功能、小肠抗氧化能力的影响。试验结果表明:1、添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠生长性能的影响添加小麦蛋白酶解物对热应激不同试验阶段小鼠(1-14 d、15-28 d)的采食量、日增重和料重比无显著影响(P>0.05)。但对试验全期(1-28 d)分析,不同添加量的小麦蛋白酶解物对小鼠采食量、日增重有不同程度的提高,料重比有不同程度的降低;与对照组相比,0.2 %小麦蛋白酶解物(Wheat gluten hydrolysates, WGH)处理组热应激小鼠的采食量极显著提高(P<0.01),日增重显著增加(P<0.05);1.8 %WGH处理组的小鼠料重比最低,比对照组低25.23 %(P>0.05)。2、添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠免疫功能的影响添加小麦蛋白酶解物能提高热应激小鼠脾脏指数和肝脏指数,提高小鼠小肠组织的白细胞介素2(Interleukin-2, IL-2)含量与分泌型免疫球蛋白A(Secretory immunoglobulin A, SigA)含量。小麦蛋白酶解物处理组脾脏指数的提高不显著(P>0.05),且不同时间段出现不同的添加量效应。试验前期(1-14 d),1.8 %WGH处理组的小鼠肝脏指数比对照组提高7.54 %(P<0.05);试验后期(15-28 d),1.0 %WGH处理组和1.8 %WGH处理组的小鼠肝脏指数分别比对照组提高9.69 %(P<0.05)和8.51 %(P<0.05)。除试验前期(1-14 d),0.2 %WGH处理组的IL-2和SIgA含量与对照组差异显著外(P<0.05),其余各处理组的IL-2和SIgA含量均与对照组有极显著差异(P<0.01)。3、添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠肠道功能的影响试验前期(1-14 d),1.8 %WGH处理组的小鼠肠道长度比对照组长7.27 %(P<0.05),试验后期(15-28 d),0.2 %WGH处理组比对照组短5.47 %(P<0.05),其它均无显著的差异(P>0.05);小麦蛋白酶解物组肠道重量与对照组相比有不同程度提高,但无显著差异(P>0.05);1.0 %WGH处理组和1.8 %WGH处理组的小鼠小肠肌层厚度、绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度比对照组均有显著提高(P<0.05);试验前期(1-14d),小麦蛋白酶解物组隐窝深度与对照组差异均不显著(P>0.05),但有下降的趋势;试验后期(15-28 d),0.2 %WGH处理组和1.0 %WGH处理组的小鼠隐窝深度分别比对照组降低28.35 %(P<0.05)和35.82 %(P<0.01)。1.0 %WGH处理组和1.8 %WGH处理组的小鼠D-木糖吸收能力均极显著高于对照组(P<0.01)。本试验条件下,小麦蛋白水解物的添加量为1.0 %时,对小鼠小肠黏膜形态的改善和肠道吸收能力的提高效果最好。4、添加小麦蛋白酶解物对热应激小鼠小肠组织抗氧化能力的影响小麦蛋白酶解物对热应激小鼠小肠组织抗氧化能力有显著的影响。与对照组相比,1.0 %WGH处理组和1.8 %WGH处理组的热应激小鼠小肠组织的谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)水平都有极显著提高(P<0.01),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平有极显著降低(P<0.01);1.0 %WGH处理组的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)水平比对照组有显著提高(P<0.05);试验前期(1-14 d),1.8 %WGH处理组小肠组织SOD水平比对照组提高32.96 %(P<0.01)。