【摘 要】
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目的：研究转染野生型、突变T34A和N端缺失8个氨基酸(N-8aa)Survivin基因的HO-8910人卵巢癌细胞的细胞周期分布和对顺铂(DDP)、紫杉醇(Taxol)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002抗肿瘤作用的影响，探讨不同survivin基因修饰方式对不同作用机制化疗药物诱导的细胞凋亡及其可能的信号通路的作用。方法：(1)转染野生型、突变T34A、缺失N-8aaSurvi
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目的：研究转染野生型、突变T34A和N端缺失8个氨基酸(N-8aa)Survivin基因的HO-8910人卵巢癌细胞的细胞周期分布和对顺铂(DDP)、紫杉醇(Taxol)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002抗肿瘤作用的影响，探讨不同survivin基因修饰方式对不同作用机制化疗药物诱导的细胞凋亡及其可能的信号通路的作用。
方法：(1)转染野生型、突变T34A、缺失N-8aaSurvivin基因和pcDNA以及未转染HO-8910细胞经10次以上传代培养后，提取总RNA，用RT-PCR法和琼脂糖凝胶电泳制备PCR产物，进行核苷酸序列测定和鉴定；(2)用流式细胞仪( FCM)测定其细胞周期分布；(3)用MTT法测定顺铂、紫杉醇和LY294002分别对转染和未转染HO-8910细胞共同培养48h后的生长抑制作用，并计算其IC50和敏感度指数(转染survivin基因的IC50/转染pcDNA的IC50,IDIC50test/IC50 control)。
结果：(1) RT-PCR及序到分析显示，转染野生型、突变T34A、缺失N-8aaSurvivin基因的HO-8910细胞均稳定表达碱基序列对应的survivin mRNA，而转染pcDNA的和未转染的HO-8910细胞均未显示survivin mRNA的表达：(2)转染野生型、突变T34A、缺失N-8aaSurvivin基因和pcDNA的HO-8910细胞的细胞周期分布具有明显的改变，其G1期分别为44.72％、63.51％、54.46％和49.64％；S期分别为54.22％、36.33％、44.92％和49.80％；G2期分别为1.06％、0.16％、0.62％和0.55％；与转染pcDNA的细胞比较，转染野生型survivin的细胞周期向S/G2期移行；转染突变T34A和N-8aaSurvivin的细胞周期向G1期移行；(3) MTT法测定结果显示，转染野生型、突变T34A、缺失N-8aaSurvivin基因的和pcDNA的HO-8910细胞对DDP、Taxol和LY294002的IC50。(μmol/L)分别为20.381±6.132、9.854±1.166、7.55±1.028和14.384±3.861；36.702±3.974、28.645±2.761、37.864±4.785和28.569±3.581；44.693±14.322、66.892±4.777、13.161±4.043和41.048±7.861。以转染pcDNA细胞的ID为1.0，转染野生型survivin基因的细胞对DDP、Taxol和LY294002的敏感性分别降低了42％、28％和9％(P<0.01)；转染缺失N-8aaSurvivin基因的细胞对DDP和LY294002的敏感性分别增加了48％和68％(P<0.01)，而对Taxol的敏感性降低了33％(P<0.01)；转染突变T34ASurvivin基因的细胞对Taxol的敏感性无变化(P>0.05)，而对LY294002的敏感性却降低了63％(P<0.01)。
结论：野生型survivin可使HO-8910细胞的细胞周期向S/G2期移行，而突变T34A、缺失N-8aaSurvivin则使细胞周期向G1期移行，提示survivin具有细胞周期G2期分布的特性；野生型survivin显著降低DDP、Taxol和LY294002的敏感性，而且没有明显的细胞周期依赖性；但突变T34ASurvivin和缺失N-8aaSurvivin对细胞周期依赖和非依赖药物的敏感性具有明显的差异，这可能与二者结构不同而对不同药物触发细胞凋亡信号通路的作用不同有关，其机制尚需进一步研究。
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