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纺锤体在细胞分裂过程中发挥重要的作用，它能否正确组装与形成直接影响染色体能否正确聚集与分离。CLTC（ClathrinHeavyChain1）是一种“星月蛋白”，在细胞有丝分裂间期执行膜泡运输的功能，而在分裂期对纺锤体的稳定和染色体在赤道板上的聚集发挥重要作用。但是，CLTC在小鼠卵母细胞减数分裂中的作用机理仍然不是很清楚。本研究以小鼠卵母细胞作为实验材料，应用体外成熟培养、体外受精、RT-PCR、WesternBlot、免疫荧光、药物处理、显微注射和染色体铺片等技术，旨在探讨CLTC在小鼠卵母细胞减数分裂及早期胚胎发育过程的表达、定位及功能。研究内容以及实验结果如下: 1.CLTC在mRNA水平的研究:收集小鼠卵母细胞减数分裂及早期胚胎发育过程的不同阶段（GV、GVBD、MⅠ、AⅠ-TⅠ、MⅡ、AⅡ-TⅡ、1-Cell及2-Cell时期），利用实时定量PCR技术检测上述各时期中CLTC的mRNA水平。结果表明，CltcmRNA在GV、GVBD和MⅠ期处于较低水平，在AⅠ-TⅠ期逐渐升高，在MⅡ期达到最高水平。在精子激活第二次恢复减数分裂后的AⅡ-TⅡ期，CltcmRNA水平下降，在1-Cell及2-Cell间期持续处于较低水平。 2.CLTC表达水平的研究:通过蛋白免疫印迹检测结果显示，CLTC在上述各时期蛋白的表达量与mRNA水平的变化趋势基本相符。CLTC在上述各时期均有相对稳定的表达，但各时期表达量不同。在GVBD后，CLTC的表达量增加，在M期达到最高水平。精子激活后的AⅡ-TⅡ期，CLTC表达量略有下降。处于分裂间期的1-Cell和2-Cell，CLTC蛋白水平又降低。 3.CLTC的亚细胞定位以及与微管蛋白共定位的研究:收集上述各个时期的卵母细胞和早期胚胎，利用激光共聚焦技术检测CLTC的亚细胞定位以及与TUBB的共定位情况。研究表明，CLTC在GV期卵母细胞内呈弥散性分布。随着GVBD的发生，CLTC集中分布于染色体附近并与TUBB共定位。在MⅠ和MⅡ期，CLTC分布于纺锤体区域并与TUBB共定位。在减数分裂进程的AⅠ-TⅠ和AⅡ-TⅡ期，CLTC分布在纺锤体两极呈现新月状。受精后的原核期，CLTC弥散性分布在胞质中。CLTC在1-Cell晚期再次聚集于纺锤体的两极。处于分裂间期的2-Cell期，CLTC弥散性分布在胞质中，并在DNA区域呈现聚集。 4.CLTC与微管蛋白定位的关联研究:用抑制微管解聚的药物Taxol处理MⅠ和MⅡ期卵母细胞后，CLTC在胞质中呈现多簇不规则的聚集，与CLTC共定位的微管蛋白也形成了多簇不规则的聚集或形成大纺锤体;用促进微管解聚的药物Nocodazole处理MⅠ和MⅡ期卵母细胞后，CLTC在胞质中呈均匀的弥散性分布，纺锤体解聚，与CLTC共定位的微管蛋白也呈弥散性分布。 5.CLTC在小鼠卵母细胞成熟过程中的作用研究:显微注射CltcsiRNA至GV期卵母细胞以抑制内源性CltcmRNA的表达。经统计，结果表明CltcsiRNA显著抑制卵母细胞的成熟。通过激光共聚焦显微镜检测纺锤体微管的形态发现，CLTC敲减的卵母细胞中纺锤体出现异常，形成了狭长纺锤体、粗大纺锤体、单极纺锤体和未组装好的纺锤体。CLTC敲减后的MⅡ期卵母细胞中出现染色体在赤道板上聚集的异常现象包括:厚赤道板、染色体聚集滞后和染色体异常分散。尽管CLTC敲减后严重影响纺锤体的形成和染色体在赤道板上的聚集，但是并未影响染色体的整倍性。 总之，CLTC蛋白在小鼠卵母细胞中对纺锤体组装和染色体赤道板集合是必不可少的，它对卵母细胞的正常成熟发挥至关重要的作用。