2-N,6-O-磺化壳聚糖与肝素结合性表皮生长因子对皮肤修复的协同作用

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肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)作为EGF家族中的一员,在皮肤修复中能促进表皮再生,因而对于加速皮肤伤口愈合十分重要。但外源性HB-EGF半衰期短,应用时面临着如何提高使用效率以及控制释放问题。本文旨在研究2-N,6-O-磺化壳聚糖(26SCS)与HB-EGF之间相互作用,在此基础上,设计了一种磺化壳聚糖修饰的纳米颗粒,将其包裹入PLGA静电纺丝支架中固载HB-EGF,并进一步从细胞学和动物层面研究了磺化壳聚糖对HB-EGF生物学效应的影响及其对皮肤伤口修复的协同效应。论文围绕上述内容开展以下研究:  (1)26SCS与HB-EGF之间的相互作用。  研究了26SCS与HB-EGF之间的相互作用。通过QCM-D实验证明26SCS与HB-EGF之间存在相互作用力,并且两者之间的亲和力强于肝素。系统考察了HB-EGF与不同浓度的26SCS结合后HB-EGF蛋白结构的变化。研究发现结合26SCS后,HB-EGF的二、三级结构都更易于处于极性环境下,肽链更加舒张,有利于HB-EGF与其受体结合。  (2)26SCS/PLGA支架的制备及其对HB-EGF固载、缓释和生物学效应的影响。  采用静电纺丝方法设计制备了含26SCS纳米颗粒的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)支架材料,将其负载HB-EGF后,研究了26SCS对HB-EGF固载、缓释以及26SCS存在下,HB-EGF对人永生化角质细胞Hacat的细胞增殖和迁移能力的影响。  (3)携载HB-EGF的26SCS/PLGA支架促进皮肤修复的动物实验研究。  在上述研究基础上,进一步通过动物体内实验评价26SCS与HB-EGF在皮肤创伤修复中的协同效应。建立小鼠皮肤伤口夹板模型,利用携载HB-EGF的26SCS/PLGA支架对其进行修复,通过大体观察、组织学评价、免疫组化检测等手段评价伤口愈合情况,从动物层面验证26SCS对于HB-EGF促进皮肤修复的协同效应。
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