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目的: 研究结膜松弛症(CCh)整合素β1的表达及杞精明目汤药物血清和转化生长因子-β1(TGF-β1)对其调控作用;观察杞精明目汤对CCh患者松弛结膜厚度的影响。 方法: 1.结膜组织整合素β1的表达:制备结膜组织冰冻切片,采用免疫荧光法检测整合素β1在单纯白内障病人、CCh和单纯白内障合并高度近视(HM)病人结膜组织中的表达。 2.CCh成纤维细胞整合素β1的表达及杞精明目汤药物血清和TGF-β1对其调控作用:分别用含不同浓度的杞精明目汤的培养基和不同浓度的TGF-β1细胞生长因子培养结膜成纤维细胞,采用Western Blot检测蛋白整合素β1的表达情况。 3.利用光学相干光断层扫描技术(OCT)对CChⅡ-Ⅲ级患者颞侧结膜厚度的测量,探讨CCh患者松弛结膜的厚度与与分级之间的关系。 4.利用OCT对Ⅱ级CCh患者颞侧结膜的厚度进行测量以及采用国际眼表面疾病指数量表(OSDI量表),研究杞精明目汤联合人工泪液和单纯人工泪液组对Ⅱ级CCh患者的治疗效果。 结果: 1.CCh患者的结膜整合素β1的表达与对照组相比显著降低,差异有统计学意义(F=501.27,P<0.05); HM组结膜整合素β1的表达与CCh组相比显著降低,差异有统计学意义(F=642.35,P<0.05)。 25%含药血清刺激CCh组与CCh相比,差异无统计学意义(P>0.05);10%含药血清刺激CCh组和20%含药血清刺激CCh组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。CCh组整合素β1蛋白表达与对照组相比显著下降,差异有统计学意义(P<0.001)。5ng/ml、10ng/ml和15 ng/ml TGF-β1组与CCh组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。 3 CChⅡ级患者颞侧球结膜上皮层厚度为37.76±5.67,CChⅢ级患者为34.84±4.93,两组比较,采用单因素方差分析:F=8.563,P<0.05,差异有统计学意义; CChⅡ级患者颞侧球结膜固有层厚度为176.68±9.72,CChⅢ级患者163.72±8.68,两组比较,采用单因素方差分析:F=9.374,P<0.05,差异有统计学意义;CChⅡ级患者颞侧球结膜全层厚度为208.44±7.63,CChⅢ级为197.56±9.86比较,采用单因素方差分析:F=8.598,P<0.05,差异有统计学意义。 4治疗组治疗前结膜上皮层厚度为35.54±5.86,治疗后为36.06±6.63;对照组结膜上皮层厚度为35.38±5.18,治疗后为35.98±7.54。两种治疗方法对Ⅱ级CCh患者球结膜上皮厚度的比较,采用成组t检验,t=-0.768,P>0.05,差异无统计学意义。治疗组治疗前结膜固有层厚度为181.54±7.53,治疗后为182.76±6.41;对照组结膜固有层厚度为179.38±6.98,治疗后为180.91±7.07。两种治疗方法对Ⅱ级CCh患者球结膜固有厚度的比较,采用成组t检验,t=-0.873,P=0.462,差异无统计学意义。 5治疗组治疗前OSDI评分为26.78±6.56,治疗后为13.06±5.14;对照组OSDI评分为25.50±7.63,治疗后为17.3±4.70。两种治疗方法对Ⅱ级CCh的OSDI评分结果影响的比较,采用成组t检验,t=-5.875,P<0.05,差异有统计学意义。 结论: 1.CCh结膜组织整合素β1在CCh和HM的组织中表达明显下降,可能通过影响成纤维细胞的胶原合成从而参与了疾病的发生。 2.5%含药血清刺激CCh组对CCh中成纤维整合素β1蛋白的表达无影响;10%含药血清刺激CCh组和20%含药血清刺激CCh组可有效上调成纤维细胞整合素β1蛋白的表达,且20%含药血清刺激CCh组效果更明显。 3.CCh结膜成纤维细胞表达整合素β1比正常对照组表达量显著下降;与CCh组相比,5ng/ml、10ng/m1和15 ng/ml TGF-β1可有效上调成纤维细胞整合素β1蛋白的表达,并呈剂量依赖性。 4.Ⅱ-ⅢCCh患者球结膜上皮层和固有层厚度膜均是变薄的。ⅡCCh患者上皮层厚度37.76±5.67μm,ⅢCCh患者上皮层厚度约为34.84±4.93μm;ⅡCCh患者固有层厚度176.68±9.72μm,ⅢCCh患者固有层厚度163.72±8.68μm。 5.观察杞精明目汤联合人工泪液治疗Ⅱ级肝肾阴虚型CCh的临床疗效,结果表明杞精明目汤虽不能改变Ⅱ级CCh患者的结膜厚度,但较单纯人工泪液治疗法更有效地改善患者眼部干涩异物感等症状。