外源性NGF对大鼠脑出血的有效性研究

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目的:探讨利用Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型,使之成为一种稳定有效,可重复的脑出血模型方法。方法:雄性SD大鼠48只随机分为实验组和对照组,将等体积Ⅶ型胶原酶和无菌生理盐水分别注入实验组和对照组大鼠尾壳核。通过观察两组大鼠在第1、3和7天不同时间点的神经功能缺损变化,最后处死后脑部尾壳核形成的血肿体积大小以及脑组织化学改变。结果:实验组大鼠都有神经功能缺损明显,尾壳核有明显出血灶,而对照组神经体征不明显,尾壳核未见明显出血,两组相比较具有明显统计学意义(p<0.05)。同样,切片HE染色中可见穿刺道大量红细胞存在,血肿周围细胞水肿明显。而对照组仅见穿刺针道有少许血细胞存在。结论:Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型是一种成功的稳定的可重复的方法。目的:探讨外源性NGF对大鼠脑出血的作用机制。方法:将SD大鼠随机分成三组,即假手术组、对照组和NGF组。对照组和NGF组均按第一部分造模方法所述以Ⅶ型胶原酶制备脑出血模型,假手术组只将给予头皮切开,不做任何处理便缝合皮肤。NGF组是经孔给予2μl混有300uNGF的生理盐水缓慢注入,对照组则给予2μl无菌生理盐水,假手术组不给予NGF或无菌生理盐水。术毕观察三组大鼠神经功能缺损变化,按第1、3和7天三个时间点处死大鼠,处死前给予BrdU抗体按50mg/kg行腹腔注射,4%多聚甲醛前固定鼠脑,取出脑组织后再以4%多聚甲醛后固定,20%和30%蔗糖液脱水,锡纸包裹后冻存于-80℃冰箱中。再做10μm厚的冰冻切片,将冰冻切片行免疫组化检测,在光学显微镜下计数新生神经元细胞(Nestin抗体标记)数目、新生血管数目(VEGF抗体标记)以及含BrdU的增殖神经元的数目,最后将各组数据性统计学分析。结果:假手术组神经功能缺损评分前后均为0分;对照组造模后有明显神经功能缺损,但后期神经功能恢复缓慢;NGF组在给予NGF后神经功能缺损评分有改善,第7天时间点改善最明显,统计学分析有意义(P<0.05)。将实验组与对照组及假手术组比较,经免疫组化染色检测,实验组Nestin抗体标记和VEGF抗体标记阳性细胞均增多,有统计学意义(P<0.05)。结论:通过本实验结果说明外源性NGF能激活脑出血模型大鼠的内源性神经干细胞(NSCs),并促进其增殖分化为神经神经细胞。同时能促进颅内神经细胞分泌VEGF,而免疫组化检测进一步说明NGF从细胞水平促进了脑出血大鼠的神经功能的恢复。
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