【摘 要】
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目的:探讨从天然药物中筛选出的抑制剂原花青素在细胞水平抑制COX-2的机制及动物水平的抗炎作用.方法:(1)台盼蓝拒染法测定RAW264.7细胞存活率,确定待筛药物合适的给药浓度;(
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目的:探讨从天然药物中筛选出的抑制剂原花青素在细胞水平抑制COX-2的机制及动物水平的抗炎作用.方法:(1)台盼蓝拒染法测定RAW264.7细胞存活率,确定待筛药物合适的给药浓度;(2)放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)测定培养上清液中PGE<,2>的含量,观察药物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞中COX-2生成及COX-2酶活性的影响,以COX-2抑制剂NS-398作阳性对照;(3)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定原花青素对LPS诱导的RAW264.7细胞中COX-2 mRNA水平的影响;(4)Western blot测定原花青素对LPS诱导的RAW264.7细胞中COX-2蛋白表达和核因子κB的亚基p65(NF-κB/p65)蛋白表达的影响;(5)电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性:提取细胞核蛋白,观察原花青素对NF-κB的DNA结合活性的影响;(6)用角叉菜胶致大鼠足爪肿胀模型观察原花青素的体内抗炎疗效,以地塞米松作阳性对照;(7)紫外分光光度法检测大鼠足爪渗出液中PGE2的含量;(8)免疫组织化学法(IHC)及Westernblot法检测角叉菜胶致炎大鼠足爪组织COX-2的表达情况.结论:(1)原花青素对PGE<,2>生物合成具有较强的抑制作用.原花青素并不直接抑制COX-2的酶活性,其抑制PGE<,2>的生物合成主要是通过抑制COX-2 mRNA及COX-2蛋白表达实现的.原花青素抑制COX-2 mRNA及蛋白表达的作用与NF-κB有关,原花青素可能通过抑制核内NF-κB蛋白的表达,抑制NF-κB的DNA结合活性而抑制COX-2的表达.(2)原花青素具有较强的抗炎作用,其机制可能与原花青素抑制炎足中COX-2表达,抑制炎足爪PGE<,2>的释放有关.
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